向日葵種子純度室內快速檢測方法的研究.pdf

1、種子是重要的農業(yè)生產資料，種子純度是保證農作物優(yōu)良品種增產潛力得以發(fā)揮的關鍵因素，種子純度檢測對保證種子質量具有重要意義。向日葵雜交種純度檢測是質量控制的重要環(huán)節(jié)，傳統(tǒng)的檢測方法在檢測向日葵種子純度中發(fā)揮著重要作用，但傳統(tǒng)的檢測方法也有一定的局限性，使得這些方法不能滿足快速、準確檢測種子純度的目的，因此，急需研究一種簡單、快速的方法檢測向日葵種子純度。本研究在AU-PAGE技術檢測玉米種子純度方法和玉米種子純度快速分子檢測技術的基礎上，

2、研究了向日葵種子純度蛋白電泳和SSR分子檢測方法，建立了向日葵種子純度室內快速檢測的方法。主要研究結果如下:
　　1.優(yōu)化改進了向日葵種子蛋白質電泳檢測技術。通過對向日葵種子貯藏蛋白組成進行研究，得出向日葵種子中水溶蛋白譜帶數最多，且含量最大，鹽溶蛋白次之，其他蛋白最少。因此，利用蛋白電泳鑒定種子純度時應以水溶蛋白和鹽溶蛋白為主。通過對向日葵蛋白提取液進行優(yōu)化，得出種子蛋白提取液中加入適量的SDS，可使泳道背景清晰，從而易于讀取分

3、析蛋白譜帶，而且增加了向日葵種子蛋白譜帶的多態(tài)性。優(yōu)化后的蛋白提取液參數為:18％尿素、12％冰乙酸、3％ TEMED、0.15％-0.2％ SDS、0.05％甲基綠。用優(yōu)化后的AU-PAGE技術對6個雜交種和9個親本進行鑒別，能夠將雜交種及父母本區(qū)分開。以一種新的命名方法對6個向日葵雜交種和9個親本建立了蛋白指紋數據庫，使得任意父母本組合都能找到相應的特異蛋白帶。
　　2.通過對DNA快速提取法進行優(yōu)化，得到了基于PCR的向日葵

4、半粒種子DNA快速提取方法。研究了提取液濃度，種子與提取液的質量體積比，提取時間，DNA模板量對PCR產物的影響，得到了向日葵DNA快速提取法的參數范圍。從215對SSR引物中篩選得到了100對多態(tài)性高，特異性好的引物，用篩選出的100對SSR引物建立了11個向日葵親本SSR引物數據庫。將DNA快速提取法和通用多重PCR技術結合，建立了向日葵種子純度SSR快速分子檢測方法。
　　3.對蛋白電泳法、SSR快速分子檢測結果與田間種植鑒