一個水稻黃綠葉突變體的鑒定與基因克隆.pdf

1、葉色突變體是研宄光合作用的重要材料。在以日本晴為受體的轉基因株系中發(fā)現(xiàn)了一個黃綠葉突變體。本研究以該突變體為研究對象，開展了表型鑒定、遺傳分析、基因克隆和初步功能分析的研究。主要研究結果如下:
　　突變體從苗期至成熟期一直表現(xiàn)為黃綠葉表型，因此將該突變體命名為ygl12。葉綠素含量分析顯示，與野生型相比，突變體葉綠素含量在不同時期均低于野生型，其中葉綠素a的含量降低幅度最大。光溫敏實驗顯示突變表型對光照強度敏感，但對溫度鈍感。葉綠

2、體超微結構分析表明突變體的葉綠體發(fā)育異常。與野生型相比，突變體有開花時間延遲，有效分蘗數(shù)、結實率、干粒重減小，劍葉變長變寬，主穗變長等表型。
　　遺傳分析表明突變性狀是由一對核隱性基因所控制。潮霉素分析表明突變性狀并不是T-DNA插入引起的，因此我們采用圖位克隆的方法克隆目的基因。利用突變體ygl12與龍?zhí)馗Φ碾s交構建了用于圖位克隆的定位群體，利用21個F2代突變個體，首先將突變基因初定位于12號染色體SSR標記ML7與L55之間

3、大約6.5cM的區(qū)段。利用F2代中的突變個體共1776個，構建ygl12附近的高密度物理圖譜。最終將目標基因定位于插入刪除標記YG4與YG5兩標記之間76.5kb的區(qū)段。水稻基因組自動注釋計劃網(wǎng)站上發(fā)現(xiàn)該區(qū)段有12個ORF，測序發(fā)現(xiàn)在LOC_Os12g23180基因有39bp的刪除。推測LOC_Os12g23180即為目標基因。通過互補試驗驗證了推測。
　　熒光定量PCR試驗發(fā)現(xiàn)ygl12中大部分參與葉綠素合成的基因轉錄本含量上調