西洋參種子休眠解除與萌發(fā)分子機(jī)理研究.pdf

1、西洋參為多年生草本植物，具有廣泛的藥理活性和藥用價(jià)值。西洋參主要通過種子繁殖，但種子具有深度休眠的特性，需要溫度層積解除休眠。目前西洋參種子休眠與萌發(fā)的分子機(jī)制尚不明確。
　　赤霉素和脫落酸是調(diào)控種子休眠與萌發(fā)的關(guān)鍵激素。為研究其作用規(guī)律，本研究采用6種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（赤霉素GA3、赤霉素GA4+7、脫落酸、氟啶酮、多效唑、烯效唑）處理西洋參種子。陰干種子進(jìn)行高溫20℃層積、裂口種子低溫4℃層積，每隔30d取樣計(jì)算胚率;在形態(tài)休眠初期

2、、中期、解除期、生理休眠初期、中期、解除期分別取樣，用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)其內(nèi)源激素GA和ABA含量。研究發(fā)現(xiàn)GA3、GA4+7可以縮短生理后熟時(shí)間，且處理后生理休眠期內(nèi)源ABA含量低于對(duì)照組。
　　通過分析轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，對(duì)125個(gè)與植物激素代謝和休眠解除與萌發(fā)相關(guān)的基因進(jìn)行半定量PCR，其中23個(gè)基因表現(xiàn)出良好的特異性，在種子層積初期(0d)表達(dá)量較低或不表達(dá)。篩選出與激素和休眠解除相關(guān)基因10個(gè)(NCED、ZEP、DEL

3、LA、GIGANTE、GA2ox、GA20ox、GA3ox、KAO、CYP707A、DRM)進(jìn)行熒光定量PCR。研究發(fā)現(xiàn)GA合成關(guān)鍵基因GA20ox、GA3ox、KAO在生理后熟期的表達(dá)高于形態(tài)后熟期，GA3、GA4+7處理后GA合成基因表達(dá)量低于對(duì)照組。
　　對(duì)西洋參種子中GA分解代謝基因PqGA2ox和GA合成關(guān)鍵基因PqGA20ox進(jìn)行克隆與序列分析，獲得GenBank登陸錄號(hào)KJ802836和KJ740524，生物信息學(xué)分