正常人和腫瘤患者CIK細(xì)胞體外擴(kuò)增能力及殺傷活性對(duì)比分析.pdf

1、癌癥對(duì)人類(lèi)健康和生命的威脅很大。手術(shù)、化療、放療是治療惡性腫瘤的三大傳統(tǒng)療法，有著各自的缺點(diǎn)。過(guò)繼免疫治療法是將有免疫活性的自體的或同種異體的免疫細(xì)胞及或其產(chǎn)物輸給患者，為患者提供現(xiàn)成的免疫力，以達(dá)到治療目的。這種方法與其它抗腫瘤藥物相比，可以在沒(méi)有損傷機(jī)體的免疫系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的前提下，直接殺傷腫瘤細(xì)胞，并且調(diào)節(jié)和增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。用于過(guò)繼免疫治療的活性細(xì)胞必須具有較強(qiáng)的細(xì)胞活性和增殖力，CIK細(xì)胞被認(rèn)為是新一代抗腫瘤過(guò)繼細(xì)胞免疫治療

2、的首選方案。本實(shí)驗(yàn)室對(duì)CIK細(xì)胞的研究有著豐富的經(jīng)驗(yàn)，到目前為止已成功地用CIK細(xì)胞治療了400多例的腫瘤患者，并有深入研究。本實(shí)驗(yàn)觀察了不同年齡的正常人與腫瘤患者PBMC在體外經(jīng)多種因子誘導(dǎo)后，其擴(kuò)增能力和對(duì)腫瘤細(xì)胞株的殺傷力的差別，為臨床上應(yīng)用CIK細(xì)胞治療腫瘤提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料與方法: 1、實(shí)驗(yàn)材料 (1)臨床資料正常人外周血樣本10例，采自本單位男性健康志愿者，25～30歲：5例，50～60歲：5例；患

3、者外周血樣本33例，采自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院肺鱗癌男性患者(全部病理經(jīng)2名病理醫(yī)師確診)，年齡41～75歲。 (2)腫瘤細(xì)胞株人乳腺癌細(xì)胞株(MDA-MB-231)、肺癌細(xì)胞株(BE-1)、前列腺癌細(xì)胞株(PC-3)。 (3)試劑 胎牛血清、胰蛋白酶、RPMI-1640培養(yǎng)基、MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒、人淋巴細(xì)胞分離液(Ficoll-Paque Plus)、抗CD<,3>單克隆抗體(MabCD<,3

4、>)、基因重組人白介素2(IL-2)、基因重組人白介素1α(IL-1α)、基因重組人干擾素γ(IFN-γ)。 (4)實(shí)驗(yàn)設(shè)備倒置熒光顯微鏡、離心機(jī)、二氧化碳培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)、電腦壓力蒸汽滅菌器. 2、實(shí)驗(yàn)方法 (1)CIK細(xì)胞的制作用淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，加入IFN-γ、IL-2、IL-1、CD3McAb誘導(dǎo)CIK細(xì)胞的生成。 (2)CIK細(xì)胞增殖的測(cè)定細(xì)胞記數(shù)板法計(jì)數(shù)細(xì)胞。

5、 (3)腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)。 (4)MTT法測(cè)CIK細(xì)胞殺瘤活性培養(yǎng)14天的CIK細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，三種腫瘤細(xì)胞株作為靶細(xì)胞，以20∶1效靶比分別把效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞加入96孔板，另設(shè)靶細(xì)胞和單獨(dú)效應(yīng)細(xì)胞組，每組設(shè)三個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)48小時(shí)后用MTT法測(cè)定殺傷活性，公式如下：殺傷活性(％)=[1-(實(shí)驗(yàn)組OD值.單獨(dú)效應(yīng)細(xì)胞OD值)/單獨(dú)靶細(xì)胞OD值]<'*>100％ (5)統(tǒng)計(jì)學(xué)處

6、理. 結(jié)果: 1、CIK細(xì)胞的增殖與正常人CIK細(xì)胞相比，腫瘤患者CIK細(xì)胞的增殖速度較慢，其最大增殖倍數(shù)也略低，同時(shí)發(fā)現(xiàn)CIK細(xì)胞的增殖速度與年齡有關(guān)，即年齡越小CIK細(xì)胞的擴(kuò)增能力越強(qiáng)。 2、MTT法測(cè)定CIK細(xì)胞的殺傷活性 (1)正常人、腫瘤患者CIK細(xì)胞對(duì)3種腫瘤細(xì)胞株的抑瘤比較將培養(yǎng)14 d的CIK細(xì)胞以20∶1效靶比殺傷3種腫瘤細(xì)胞株(MDA-MB-231，BE-1，PC-3)，正常人的CIK

7、對(duì)三種腫瘤細(xì)胞株(MDA-MB-231，BE-1，PC-3)的殺傷率分別為75.80±10.1，74.2±8.5，81.3±9.6，明顯高于腫瘤患者。 (2)不同年齡段腫瘤患者CIK細(xì)胞對(duì)3種腫瘤細(xì)胞株的抑瘤比較將腫瘤患者按年齡段分組，50-60歲、60-70歲、>70歲組對(duì)三種腫瘤細(xì)胞株的殺傷率明顯低于<50歲組；50-60歲、60-70歲兩組之間殺傷率沒(méi)有顯著差別，但均明顯高于>70歲組，可以認(rèn)為CIK細(xì)胞對(duì)腫瘤的殺傷力與年