二價(jià)鎳對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的影響.pdf

1、研究背景及目的:
　　鎳在地殼元素含量中排第24位，人體不可避免地接觸這一元素。環(huán)境中主要的鎳污染主要來自煤炭和重油的燃燒以及煉油產(chǎn)生的三廢，瀝青等副產(chǎn)品。采礦、電鍍工業(yè)、垃圾焚燒和沙塵等也會(huì)造成鎳污染，通過水源、土壤、空氣等途徑進(jìn)入人體，給人們身體健康帶來嚴(yán)重危害，影響人體正常生理過程。研究表明:小劑量鎳離子長(zhǎng)時(shí)間作用于肺BEAS-2B細(xì)胞、正常皮膚上皮細(xì)胞后會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生異常凋亡、甚至惡性轉(zhuǎn)化。二價(jià)鎳是鎳在生物體內(nèi)的主要形態(tài)。

2、長(zhǎng)期接觸二價(jià)鎳可能引起炎癥反應(yīng)和致畸作用，并使約5％-15％的女性和0.5％-1％的男性致敏。世界衛(wèi)生組織已把鎳作為致癌因素之一，研究顯示:鎳與鼻及肺部癌癥的發(fā)生有關(guān)。
　　含鎳合金廣泛應(yīng)用于烤瓷冠、局部可摘義齒等牙科治療領(lǐng)域。研究發(fā)現(xiàn):通過唾液的電化學(xué)腐蝕，口腔含鎳合金可緩慢析出鎳離子。鎳離子污染對(duì)口腔健康的影響，特別是鎳合金在口腔內(nèi)廣泛運(yùn)用后的生物安全性問題越來越引起人們的關(guān)注，但迄今為止，結(jié)論不一。臨床經(jīng)常發(fā)現(xiàn):鎳合金周圍可

3、見冠牙齦充血、變色。研究也發(fā)現(xiàn):含鎳合金冠析出鎳離子主要沉積在冠周圍的牙齦組織中。因此，了解鎳離子對(duì)牙齦或正?？谇簧掀さ挠绊懛浅１匾?。
　　研究方法:
　　本研究以小鼠成纖維細(xì)胞系PA317（由浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院王心華博士饋贈(zèng)）為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以不同濃度(0-800μM)的氯化鎳(NiCl2)作用。通過倒置顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)觀察，Cell Counting Kit-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期，West

4、ern Blot法檢測(cè)二價(jià)鎳對(duì)PA317細(xì)胞凋亡標(biāo)志性蛋白p21蛋白，核轉(zhuǎn)錄因子κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）和環(huán)氧合成酶Ⅱ（cyclooxygenase2，COX-2）信號(hào)通路的表達(dá)情況，探討二價(jià)鎳對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞的周期、凋亡的影響，并對(duì)二價(jià)鎳影響細(xì)胞生長(zhǎng)影響的機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　研究結(jié)果:
　　倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞學(xué)形態(tài)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)二價(jià)鎳對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞作用24 h時(shí)，

5、小鼠成纖維細(xì)胞隨二價(jià)鎳濃度升高而逐步出現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。細(xì)胞體積縮小，連接消失，與周圍的細(xì)胞脫離，懸浮細(xì)胞增多，細(xì)胞質(zhì)呈明顯的空泡化。而當(dāng)200μM二價(jià)鎳作用小鼠成纖維細(xì)胞時(shí)，隨二價(jià)鎳作用時(shí)間增長(zhǎng)而凋亡率逐漸增高。二價(jià)鎳作用小鼠成纖維細(xì)胞24 h后，細(xì)胞G2/M期比例增加，細(xì)胞在二價(jià)鎳作用下，細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。經(jīng)流式細(xì)胞儀分析，經(jīng)200μM、400μM、600μM、800μM濃度組二價(jià)鎳作用24 h后PA317細(xì)胞的凋亡率分別為5

6、.9％、17.0％、20.7％、63.4％呈一定的數(shù)量關(guān)系，Cell Counting Kit-8實(shí)驗(yàn)證實(shí)了二價(jià)鎳濃度抑制細(xì)胞正常增殖之間的正相關(guān)性。同時(shí)，NF-κB，COX-2信號(hào)通路及p21蛋白的表達(dá)水平隨著二價(jià)鎳作用濃度和作用時(shí)間的增加而表現(xiàn)出逐漸上升的趨勢(shì)。
　　結(jié)論:
　　本研究表明，二價(jià)鎳對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞的增殖起抑制作用，誘導(dǎo)其凋亡，NF-κB，COX-2信號(hào)通路及p21凋亡相關(guān)蛋白參與二價(jià)鎳促細(xì)胞凋亡過程，且與