DNA序列、ISSR標(biāo)記在藥用植物種質(zhì)鑒別中的應(yīng)用.pdf

1、本文運(yùn)用rDNAITS區(qū)序列對花椒及其混淆品、花椒的野生居群、澤瀉的野生居群進(jìn)行了鑒別，并對它們的親緣關(guān)系進(jìn)行了探討。花椒ITS區(qū)序列總長度為619-620bp，長度變異較少，與其混淆種長度僅相差4bp。花椒各居群中，rDNAITS區(qū)堿基序列有15個變異位點(diǎn)、12個信息位點(diǎn)、3個特異性識別位點(diǎn)。與其混淆品間的堿基差異則較為顯著，多達(dá)71個變異位點(diǎn)。依據(jù)花椒ITS區(qū)的序列特征可以準(zhǔn)確鑒別各居群的花椒及其混淆品；親緣關(guān)系密切的花椒居群在地理

2、位置上也非常靠近。澤瀉rDNAITS區(qū)的堿基序列總長度確定為640bp，江澤瀉和建澤瀉的ITS區(qū)堿基序列完全一致，川澤瀉與建澤瀉(江澤瀉)在rDNAITS區(qū)堿基序列有2個穩(wěn)定的變異位點(diǎn)，分別位于ITS1和ITS2區(qū)段。依據(jù)澤瀉rDNAITS區(qū)的序列特征可以進(jìn)一步鑒別川澤瀉和建澤瀉，為澤瀉居群的鑒別提供可靠的分子標(biāo)記。 運(yùn)用trnL-F區(qū)序列對花椒及其偽品進(jìn)行了鑒別。花椒cpDNAtrnL-F間隔區(qū)序列為370bp、AT百分比為6

3、2.2％。盡管花椒的果實(shí)在外部形態(tài)，物理特性上與偽品差異較小，但在cpDNAtrnL-F間隔區(qū)序列上卻存在著一定的差異。該序列在屬以下的分類階元中同源性極高，可達(dá)100％。根據(jù)cpDNAtrnL-F間隔區(qū)堿基序列的差異，能有效地鑒別花椒屬以上分類階元的偽品。 針對鐵皮石斛ISSR反應(yīng)的特點(diǎn)，建立了適用于鐵皮石斛ISSR-PCR分析的反應(yīng)體系和條件。利用錨定PCR法，從76個ISSR引物中篩選出10個多態(tài)性豐富的引物進(jìn)行ISSR擴(kuò)