DETECTION OF Mycoplasma hyopneumoniae FROM SWINE CLINICAL SAMPLES USING AVAILABLE DIAGNOSTIC TOOLS.pdf

1、豬肺炎支原體(Mhyo)是引發(fā)地方性豬肺炎(EPP)的病原體，同時也是豬呼吸道疾病綜合征(DRDC)發(fā)生的有力推動者，DRDC通過降低豬生產(chǎn)性能進而危害豬群。
　　為了減輕和消除Mhyo感染的影響，一些基于以前研究的診斷方法在豬生產(chǎn)中已經(jīng)得到應用，旨在建立豬群實時健康數(shù)據(jù)，并且取得了不同程度的成功。感染流行病學的復雜性使得難以完全消除Mhyo，這意味診斷和良好的管理是感染控制和減少疾病暴發(fā)的最好方法。本次研究旨在比較現(xiàn)有豬群健康數(shù)

2、據(jù)的檢測方法，提高我們對中國Mhyo傳播和感染的認識。因此，進行以下試驗步:
　　ⅰ)比較巢式PCR和實時定量PCR對自然條件下豬群Mhyo的檢測差異;
　?、?比較實時定量PCR、ELISA和細菌培養(yǎng)對自然條件下豬群Mhyo的檢測差異;
　?、?比較不同樣品尤其是血液和唾液中抗體存在及水平之間的差異。
　　首先，我們檢測鼻拭子樣品，比較豬場Mhyo感染率。豬日齡分別為7，14，21，28，30，和35d，采用巢

3、式PCR和實時定量PCR檢測早期Mhyo感染程度，確定仔豬最易感染時間。其次，使用實時定量PCR、ELISA和細菌培養(yǎng)對8周齡仔豬進行檢測，調查8周齡時感染Mhyo的豬是否會出現(xiàn)血清轉陽現(xiàn)象，并且分析基于上述三種方法給出豬群健康數(shù)據(jù)的可行性。最后，比較鼻拭子、血液和唾液三種樣品中抗體水平的差異。樣品每周采集一次，共三周，用P97R1蛋白包被96孔板后進行間接ELISA檢測抗體水平。
　　本次研究結果如下:
　　1、實時定量P

4、CR檢測優(yōu)于巢式PCR
　　實時定量PCR檢測能力更強，所有日齡仔豬的303個樣品中檢出152個陽性樣品(50.2％)。本次研究中，實時定量PCR敏感性體現(xiàn)在試驗后1min即可檢出10拷貝數(shù)的MhyoDNA/μl。巢式PCR檢出38個陽性樣品(12.5％)，22個樣品(7.3％)經(jīng)兩種方法檢測均呈陽性，127個樣品(41.9％)經(jīng)兩種方法檢測均呈陰性。對7日齡和35日齡仔豬的樣品進行實時定量PCR和巢式PCR檢測，發(fā)現(xiàn)Mhyo感染

5、率均最高，7日齡仔豬巢式PCR檢測感染率為15.6％，實時定量PCR檢測感染率為53.1％;35日齡仔豬巢式PCR檢測感染率為18.4％，實時定量PCR檢測感染率為56.6％.
　　2、實時定量PCR檢測優(yōu)于ELISA和細菌培養(yǎng)
　　實時定量PCR從102個樣品中檢出81個陽性樣品(79.4％)，而細菌培養(yǎng)Mhyo陽性檢出率則為51％(52/102)且陽性樣品CCU為10-7。細菌培養(yǎng)時培養(yǎng)基顏色變化時間是4-11d。然而，

6、ELISA檢測所有樣品均為陰性，該結果與實時定量PCR檢測結果匹配率為11/102(10.7％)，遠低于細菌培養(yǎng)與實時定量PCR的匹配率。
　　3、ELISA檢測唾液樣品的結果和檢測血液樣品的結果具有相關性
　　ELISA檢測唾液時，第四組豬4周齡時的樣品較3周齡樣品吸光值降低16.7％，其余組豬4周齡時的樣品較3周齡樣品吸光值均顯著升高。ELISA檢測血液樣品時，第四組豬4周齡樣品較3周齡樣品吸光值降低17.2％，其余組豬