DETECTION OF Mycoplasma hyopneumoniae FROM SWINE CLINICAL SAMPLES USING AVAILABLE DIAGNOSTIC TOOLS.pdf

1、豬肺炎支原體(Mhyo)是引發(fā)地方性豬肺炎(EPP)的病原體，同時(shí)也是豬呼吸道疾病綜合征(DRDC)發(fā)生的有力推動(dòng)者，DRDC通過(guò)降低豬生產(chǎn)性能進(jìn)而危害豬群。
　　為了減輕和消除Mhyo感染的影響，一些基于以前研究的診斷方法在豬生產(chǎn)中已經(jīng)得到應(yīng)用，旨在建立豬群實(shí)時(shí)健康數(shù)據(jù)，并且取得了不同程度的成功。感染流行病學(xué)的復(fù)雜性使得難以完全消除Mhyo，這意味診斷和良好的管理是感染控制和減少疾病暴發(fā)的最好方法。本次研究旨在比較現(xiàn)有豬群健康數(shù)

2、據(jù)的檢測(cè)方法，提高我們對(duì)中國(guó)Mhyo傳播和感染的認(rèn)識(shí)。因此，進(jìn)行以下試驗(yàn)步:
　　ⅰ)比較巢式PCR和實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)自然條件下豬群Mhyo的檢測(cè)差異;
　?、?比較實(shí)時(shí)定量PCR、ELISA和細(xì)菌培養(yǎng)對(duì)自然條件下豬群Mhyo的檢測(cè)差異;
　　ⅲ)比較不同樣品尤其是血液和唾液中抗體存在及水平之間的差異。
　　首先，我們檢測(cè)鼻拭子樣品，比較豬場(chǎng)Mhyo感染率。豬日齡分別為7，14，21，28，30，和35d，采用巢

3、式PCR和實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)早期Mhyo感染程度，確定仔豬最易感染時(shí)間。其次，使用實(shí)時(shí)定量PCR、ELISA和細(xì)菌培養(yǎng)對(duì)8周齡仔豬進(jìn)行檢測(cè)，調(diào)查8周齡時(shí)感染Mhyo的豬是否會(huì)出現(xiàn)血清轉(zhuǎn)陽(yáng)現(xiàn)象，并且分析基于上述三種方法給出豬群健康數(shù)據(jù)的可行性。最后，比較鼻拭子、血液和唾液三種樣品中抗體水平的差異。樣品每周采集一次，共三周，用P97R1蛋白包被96孔板后進(jìn)行間接ELISA檢測(cè)抗體水平。
　　本次研究結(jié)果如下:
　　1、實(shí)時(shí)定量P

4、CR檢測(cè)優(yōu)于巢式PCR
　　實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)能力更強(qiáng)，所有日齡仔豬的303個(gè)樣品中檢出152個(gè)陽(yáng)性樣品(50.2％)。本次研究中，實(shí)時(shí)定量PCR敏感性體現(xiàn)在試驗(yàn)后1min即可檢出10拷貝數(shù)的MhyoDNA/μl。巢式PCR檢出38個(gè)陽(yáng)性樣品(12.5％)，22個(gè)樣品(7.3％)經(jīng)兩種方法檢測(cè)均呈陽(yáng)性，127個(gè)樣品(41.9％)經(jīng)兩種方法檢測(cè)均呈陰性。對(duì)7日齡和35日齡仔豬的樣品進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR和巢式PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)Mhyo感染

5、率均最高，7日齡仔豬巢式PCR檢測(cè)感染率為15.6％，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)感染率為53.1％;35日齡仔豬巢式PCR檢測(cè)感染率為18.4％，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)感染率為56.6％.
　　2、實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)優(yōu)于ELISA和細(xì)菌培養(yǎng)
　　實(shí)時(shí)定量PCR從102個(gè)樣品中檢出81個(gè)陽(yáng)性樣品(79.4％)，而細(xì)菌培養(yǎng)Mhyo陽(yáng)性檢出率則為51％(52/102)且陽(yáng)性樣品CCU為10-7。細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基顏色變化時(shí)間是4-11d。然而，

6、ELISA檢測(cè)所有樣品均為陰性，該結(jié)果與實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果匹配率為11/102(10.7％)，遠(yuǎn)低于細(xì)菌培養(yǎng)與實(shí)時(shí)定量PCR的匹配率。
　　3、ELISA檢測(cè)唾液樣品的結(jié)果和檢測(cè)血液樣品的結(jié)果具有相關(guān)性
　　ELISA檢測(cè)唾液時(shí)，第四組豬4周齡時(shí)的樣品較3周齡樣品吸光值降低16.7％，其余組豬4周齡時(shí)的樣品較3周齡樣品吸光值均顯著升高。ELISA檢測(cè)血液樣品時(shí)，第四組豬4周齡樣品較3周齡樣品吸光值降低17.2％，其余組豬