籃子魚養(yǎng)殖環(huán)境微生物多樣性及其腸道內(nèi)與滸苔多糖降解相關(guān)菌株的研究.pdf

1、滸苔的爆發(fā)對(duì)海水養(yǎng)殖、海洋生態(tài)環(huán)境及沿海旅游業(yè)的發(fā)展都非常不利。目前對(duì)滸苔的綜合利用的研究還比較少。研究報(bào)道滸苔多糖具有硫酸多糖的生理活性，但多糖一般要在一定的分子量范圍內(nèi)才具有多糖的生理活性。目前關(guān)于微生物降解滸苔多糖的研究還非常少，本論文以喜好滸苔為食料的籃子魚為研究對(duì)象，通過(guò)從其腸道內(nèi)獲得高效利用滸苔多糖的降解菌株和菌群進(jìn)行滸苔多糖生物降解的研究，并對(duì)籃子魚的養(yǎng)殖區(qū)進(jìn)行環(huán)境微生物多樣性的分析，以期為滸苔多糖的高效利用及滸苔作為飼料

2、來(lái)進(jìn)行籃子魚的高效養(yǎng)殖奠定基礎(chǔ)，本論文的主要研究結(jié)果如下：
　　利用PCR-DGGE結(jié)合16S rDNA文庫(kù)的方法分析黃斑籃子魚養(yǎng)殖環(huán)境中水體、表層沉積物、滸苔表面及籃子魚腸道微生物多樣性。研究結(jié)果表明：籃子魚養(yǎng)殖環(huán)境水體細(xì)菌分屬于Actinobacteria、Bacteroidetes、Verrucomicrobia、α、β、γ-Proteobacteria、Unidentified bacteria?；@子魚養(yǎng)殖環(huán)境表層沉積物細(xì)

3、菌分屬于α、γ、δ-Proteobacteria、Firmicutes、Bacteroidetes、Chlorobi、Unidentified bacteria?；@子魚腸道細(xì)菌分屬于α、β、γ、δ、ε-Proteobacteria、Actinobacteria、Firmicutes、Bacteroidetes、Spirochaetes。滸苔表面細(xì)菌分屬于α、γ-Proteobacteria、Actinobacteria、Firmicut

4、es、Planctomycetes、Fusobacteria、Verrucomicrobia、Unidentified bacteria。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)籃子魚養(yǎng)殖池中水體、表層沉積物、滸苔表面和籃子魚腸道微生物的組成存在著明顯的差異，多樣性較豐富。
　　采用熱水法進(jìn)行滸苔多糖的提取，對(duì)經(jīng)過(guò)DEAE-Sephraose Flast Flow分離純化的滸苔多糖進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。結(jié)果表明滸苔多糖EP2中多糖的含量為58％，蛋白質(zhì)含量為1.06

5、%，硫酸根含量為22%。紅外光譜分析表明滸苔多糖是具有硫酸基的酸性多糖，利用GC-MS分析滸苔多糖組分表明其包含阿拉伯糖、鼠李糖、來(lái)蘇糖、吡喃甘露糖、木糖和葡萄糖。
　　以制備的滸苔多糖作為唯一碳源，從籃子魚腸道內(nèi)篩選得到一株能夠降解滸苔多糖的菌株Vibrio sp.B30，其最適的產(chǎn)滸苔多糖降解酶的條件為培養(yǎng)時(shí)間24h、發(fā)酵溫度30℃、起始pH為7、最適氮源為硫酸銨。該酶的最適催化溫度為50℃、pH為7，10mmol/L的鈣離子

6、、鈉離子能夠較明顯提高該酶酶酶活力。0.5g/L和1g/L的NP40、聚氯乙烯月桂醚、Tween80、Tween20、TritionX-100表面活性劑對(duì)滸苔多糖降解酶活力具有一定的提高作用。
　　以滸苔多糖作為唯一碳源，從籃子魚腸道內(nèi)篩選得到一組穩(wěn)定且高效的滸苔多糖降解菌群，該菌群的最大產(chǎn)酶能力為470U/mL，其能消化利用75%以上的滸苔多糖的糖苷鍵。利用PCR-DGGE結(jié)合克隆文庫(kù)的方法研究該混合菌群的結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)優(yōu)勢(shì)菌屬為弧菌