CryⅠAC基因的克隆及轉(zhuǎn)化結(jié)球甘藍(lán)的研究.pdf

1、結(jié)球甘藍(lán)((Brassica olerecea var，capitate)是我國(guó)的一種重要蔬菜，栽培面積已達(dá)幾十萬(wàn)公頃。生產(chǎn)上結(jié)球甘藍(lán)蟲害發(fā)生相當(dāng)嚴(yán)重，造成了產(chǎn)量和品質(zhì)的損失。危害結(jié)球甘藍(lán)的主要害蟲是鱗翅目的昆蟲，其中主要包括菜粉蝶和小菜蛾等。 由于在已有的種質(zhì)資源中很難找到可用的抗蟲材料這使得蔬菜常規(guī)抗蟲育種受到了限制。利用基因工程技術(shù)手段培育抗蟲蔬菜新品種是農(nóng)業(yè)發(fā)展的一個(gè)重要方向?；蚬こ碳夹g(shù)不僅安全有效而且投資少、見效快、

2、特異性殺滅害蟲和不污染環(huán)境。植物基因工程為抗性育種提供了一條有效的方法。人們己從細(xì)菌中分離得到蘇云金芽抱桿菌毒蛋白基因(Bt)。其蛋白產(chǎn)物對(duì)鱗翅目昆蟲具有特異的毒殺作用而對(duì)高等動(dòng)物和人無(wú)害。因此，將Bt基因轉(zhuǎn)入結(jié)球甘藍(lán)而獲得抗蟲材料而成為可能。 本研究?jī)?nèi)容主要涉及Bt基因的克隆，結(jié)球甘藍(lán)高頻再生體系的建立，植物表達(dá)載體構(gòu)建，轉(zhuǎn)化獲得陽(yáng)性植株，以及對(duì)轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測(cè)。 取得的主要研究結(jié)果如下： l 克隆了一段C

3、ry I AC基因：經(jīng)過限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng)，克隆了一段基因，同源性達(dá)到100％，屬于CryIAc gene類型。 2 建立了結(jié)球甘藍(lán)3號(hào)品種的離體再生體系：以子葉節(jié)為外植體，不定芽培養(yǎng)基是：6-BA(4.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)．生根培養(yǎng)基是1/2MS++NAA(0.2mg/L)。 3 確定了卡那霉素(Km)在不同時(shí)期的篩選濃度：通過對(duì)不同時(shí)期的卡那霉素濃度的篩選，得出在不定芽時(shí)期的篩選濃度是25mg/L