盧戈氏液染色法結(jié)合COX-2、VEGF-C、EGFR、ki-67、P63蛋白表達(dá)在食管癌早期病變中的意義.pdf

1、背景：我國(guó)是食管癌高發(fā)國(guó)家，以華北晉、冀、豫太行山地區(qū)死亡率最高，其次以江蘇、福建、四川等省受害也甚大。迄今，其確切病因和機(jī)制仍不十分清楚。在食管癌早期病變的發(fā)生、發(fā)展過程中，癌前病變是一個(gè)活躍、不穩(wěn)定的發(fā)展階段，具有雙向轉(zhuǎn)歸的特性，已引起廣泛關(guān)注。食管粘膜盧戈氏染色是發(fā)現(xiàn)早期食管癌及癌前病變的有效方法。如何在內(nèi)鏡下檢出早期病變，并經(jīng)病理和現(xiàn)代分子技術(shù)及時(shí)確定早期食管癌及癌前狀態(tài)，對(duì)食管癌的預(yù)防、早期診治和預(yù)后具有重要意義，也是近年來臨

2、床病理研究的熱點(diǎn)。 目的： 本研究應(yīng)用內(nèi)鏡盧戈液染色法聯(lián)合活檢組織COX-2、VEGF-C、EGFR、ki-67、P63蛋白檢測(cè)，旨在分析與食管癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的多個(gè)基因蛋白在癌變不同階段的表達(dá)狀況、色素內(nèi)鏡檢查與病理結(jié)果之間的相關(guān)性、以及各基因蛋白之間的相關(guān)性，從食管癌的發(fā)生、血管、淋巴管生成和細(xì)胞增殖等多方面探討癌前病變的分子機(jī)制和癌變的早期分子事件，為食管癌前病變和早期癌的診斷提供新的科學(xué)依據(jù)。 方法：

3、 1．內(nèi)鏡下縱觀食管粘膜全貌，細(xì)致觀察局部微細(xì)形態(tài)變化，采用1.25％盧戈氏液染色，記錄食管粘膜著色情況、部位、邊緣、范圍等。染色后顯色模式分為四級(jí)(標(biāo)準(zhǔn)參照Masaki法)，按照標(biāo)準(zhǔn)記錄歸類。 2．活檢組織10％福爾馬林固定，石蠟包埋，HE染色，進(jìn)行組織學(xué)診斷，根據(jù)其異型性程度和(或)累及范圍分為低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變和高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及早期癌。 3．從內(nèi)鏡食管盧戈氏液染色檢查1879例中，隨機(jī)選擇病理檢查結(jié)果為早期癌64

4、例、高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變34例、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變35例，并選取正常粘膜13例做對(duì)照，通過免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)COX-2、VEGF-C、EGFR、ki-67、P63的蛋白表達(dá)。 4．將內(nèi)鏡染色分級(jí)、組織學(xué)診斷及基因蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)照研究和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： (1)內(nèi)鏡染色圖像與組織學(xué)診斷關(guān)系：分析結(jié)果顯示，食管粘膜病灶盧戈氏染色肉眼觀察的圖像級(jí)別，與病理診斷結(jié)果之間存在顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系，即隨著食管染色級(jí)別的降

5、低，組織學(xué)病變程度加重。 (2)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：病理分級(jí)各組間COX2、VEGF-C、GEFR、Ki67、P63表達(dá)量構(gòu)成比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。病理分級(jí)與上述各蛋白的表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系，隨著病理分級(jí)的增高，COX2、VEGF-C、GEFR、Ki67、P63蛋白表達(dá)量也增高。VEGF與EGFR、Ki67、P63蛋白表達(dá)量、EGFR與Ki67蛋白表達(dá)量、 Ki67與P63蛋白表達(dá)量均存在正相關(guān)關(guān)系。 結(jié)論： (1)

6、內(nèi)鏡輔以染色盧戈氏液技術(shù)及病理檢查已成為當(dāng)今發(fā)現(xiàn)、診斷食管癌前病變的最佳方法，準(zhǔn)確可靠，克服了內(nèi)鏡取檢的隨意性和盲目性，為癌前病變的進(jìn)一步研究起到最基本保障作用。 (2)在食管癌早期病變中，隨著食管上皮病變的加重，Cox-2陽性表達(dá)率和表達(dá)強(qiáng)度呈上升趨勢(shì)，提示Cox-2是食管癌病變過程的一個(gè)早期分子事件，其蛋白的表達(dá)在食管上皮癌變過程中可能起著重要作用。 (3)VEGF-c在活檢組織中表達(dá)量的增加與病理分級(jí)程度呈正相關(guān)關(guān)

7、系，可以提示細(xì)胞的惡性分化趨勢(shì)或程度，可能作為食管早期癌發(fā)生的預(yù)警指標(biāo)之一。 (4)EGFR表達(dá)增強(qiáng)是食管癌早期病變發(fā)生發(fā)展過程中的分子事件，在活檢組織中EGFR蛋白表達(dá)量呈中、強(qiáng)度表達(dá)，預(yù)示可能進(jìn)入癌前病變的發(fā)展階段，成為上皮內(nèi)瘤變的預(yù)測(cè)指標(biāo)。 (5)Ki67在正常食管粘膜中不表達(dá)或低度表達(dá)，而在低級(jí)別瘤變中Ki67表達(dá)量與正常粘膜表達(dá)已有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示Ki67可作為食管癌前病變的生物學(xué)指標(biāo)。 (6)P63表

8、達(dá)量在上皮內(nèi)瘤變及早期癌階段呈中等度或強(qiáng)度表達(dá)，預(yù)示病變進(jìn)展至癌前病變的階段，可作為食管癌前病變的生物學(xué)指標(biāo)。 (7)VEGF表達(dá)量與EGFR、Ki67、P63表達(dá)量、EGFR與Ki67表達(dá)量、 Ki67與P63表達(dá)量均存在正相關(guān)關(guān)系，說明食管癌早期病變中存在著多因素、多基因的協(xié)同作用的機(jī)制。本研究結(jié)果顯示， EGFR與VEGF-C、Ki-67、P63，尤其是VEGF-C、Ki-67與P63的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于預(yù)測(cè)上皮內(nèi)瘤變的發(fā)展趨勢(shì)