磁性納米顆粒介導(dǎo)PTEN基因轉(zhuǎn)染對耐順鉑肺腺癌細(xì)胞生長及耐藥的影響.pdf

1、目的:評價(jià)聚乙烯亞胺（PEI）包裹的氧化鐵磁性納米顆粒polyMAG-1000介導(dǎo)野生型PTEN基因轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率、表達(dá)持續(xù)性及體系毒性。研究野生型PTEN基因轉(zhuǎn)染對耐順鉑肺腺癌A549/DDP細(xì)胞生長及耐藥的影響。 方法:1.以polyMAG-1000及脂質(zhì)體分別介導(dǎo)野生型PTEN基因轉(zhuǎn)染A549/DDP細(xì)胞，通過熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀觀察轉(zhuǎn)染效率；通過RT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)檢測轉(zhuǎn)染前后PTEN mRNA、蛋白的表達(dá)；以M

2、TT法觀察轉(zhuǎn)運(yùn)體系的毒性。2.進(jìn)一步以MTT法檢測PTEN基因轉(zhuǎn)染對A549/DDP細(xì)胞生長及耐藥的影響，以流式細(xì)胞儀觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞周期及凋亡的變化。 結(jié)果:1.PolyMAG-1000介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染其轉(zhuǎn)染效率（52.22±2.41）％明顯高于脂質(zhì)體（32.15±3.13）％。RT-PCR結(jié)果顯示磁性納米顆粒介導(dǎo)組在轉(zhuǎn)染后5天內(nèi)mRNA含量無明顯下降，脂質(zhì)體介導(dǎo)組PTEN mRNA含量逐漸下降。PolyMAG-1000轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在2μ

3、l/ml（v：v）濃度，4h作用時(shí)間無明顯的細(xì)胞毒性。2.野生型PTEN基因轉(zhuǎn)染A549/DDP細(xì)胞后2-6天其存活率下降；納米顆粒介導(dǎo)組生長抑制效應(yīng)較脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組更強(qiáng)。流式細(xì)胞分析可見野生型PTEN基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞G0-G1期比例明顯增加，凋亡率增加。MTT法發(fā)現(xiàn)，A549/DDP細(xì)胞對順鉑的半數(shù)抑制濃度IC50為（193.8±21.3）μmol/L；經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)的野生型PTEN基因轉(zhuǎn)染A549/DDP細(xì)胞72小時(shí)后，細(xì)胞對順鉑的IC50

4、降為（120.3±11.5）μmol/L；而經(jīng)磁性納米顆粒介導(dǎo)的野生型PTEN基因轉(zhuǎn)染72小時(shí)后，A549/DDP細(xì)胞對順鉑的IC50降為（72.8±10.9）μmol/L。 結(jié)論:1.磁性納米顆粒polyMAG-1000可介導(dǎo)野生型PTEN基因轉(zhuǎn)染A549/DDP細(xì)胞，其轉(zhuǎn)染效率明顯高于脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，且較之更加持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)。磁性納米顆粒轉(zhuǎn)運(yùn)體系在轉(zhuǎn)染的劑量及作用時(shí)間下無明顯的細(xì)胞毒性。2.野生型PTEN基因轉(zhuǎn)染可抑制耐順