間隙連接半通道的開放加劇鎘誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和細(xì)胞損傷.pdf

1、目的：間隙連接(Gap Junction,GJ)是細(xì)胞間通道,在細(xì)胞的增殖、遷移、分化和生存等生理活動中起重要作用,同時還參與許多病理過程。鎘是重金屬環(huán)境污染物,可導(dǎo)致多種細(xì)胞損傷。本次實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖翘接慓J在鎘誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷中的作用及作用機(jī)理。
　　 方法:1.用豬腎小管上皮細(xì)胞和小鼠成纖維細(xì)胞模型做體外試驗(yàn)。2.用Formazan方法分析細(xì)胞生存能力。3.蛋白免疫印跡法測定JNK蛋白的表達(dá)水平。4.用LY攝人和ATP釋放實(shí)驗(yàn)觀察

2、間隙連接半通道的開放。
　　 結(jié)果:1.腎小管上皮細(xì)胞系(ILC-PK1)表達(dá)野生型即功能性Cx43蛋白的細(xì)胞對鎘的敏感性明顯高于表達(dá)變異型即非功能性Cx43蛋白的細(xì)胞。主要表現(xiàn)是細(xì)胞形態(tài)的變化；細(xì)胞活性的降低；c-jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal kinase,JNK)活性的增強(qiáng)。2.鎘誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷與細(xì)胞的氧化還原水平密切相關(guān)。3.表達(dá)不同水平Cx43蛋白的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞對鎘誘導(dǎo)的損傷與細(xì)胞內(nèi)的GSH水

3、平相關(guān)。鎘刺激成纖維細(xì)胞發(fā)現(xiàn),隨著鎘作用時間的延長,細(xì)胞內(nèi)的GSH水平梯度降低而細(xì)胞外的GSH水平增加,而且這種變化在Cx43+/+細(xì)胞比Cx43-/-細(xì)胞更明顯。4.在Cx43+/+細(xì)胞鎘誘導(dǎo)GJ的半通道(GJ Hemichannel)開放,其表現(xiàn)是鎘促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)熒光黃(Lucifer Yellow,LY)的攝入和增強(qiáng)細(xì)胞外ATP漏出。
　　 結(jié)論:我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果首次表明在鎘誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷中GJ是一個重要因素。鎘誘導(dǎo)GJ半通道的