P7對bFGF刺激的SKOV3細(xì)胞侵襲的抑制作用.pdf

1、研究目的:首先以bFGF為靶標(biāo)從噬菌體隨機七肽庫中篩選出可結(jié)合bFGF的新型結(jié)合先導(dǎo)肽P7。在此基礎(chǔ)上，深入研究P7體外抑制bFGF誘導(dǎo)的人上皮性卵巢癌細(xì)胞（SKOV3細(xì)胞）侵襲能力的作用機制。
　　研究方法:1.MTT法分別檢測不同濃度的bFGF及P7對SKOV3細(xì)胞增殖的影響及不同濃度的P7對bFGF誘導(dǎo)的SKOV3細(xì)胞增殖的抑制率;2.采用倒置顯微鏡觀察在檢測濃度范圍內(nèi)的P7對細(xì)胞形態(tài)的影響;3.通過細(xì)胞劃痕實驗檢測先導(dǎo)肽P

2、7對bFGF誘導(dǎo)的SKOV3細(xì)胞遷移能力的影響;4.SYBR GreenⅠ熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測P7對bFGF刺激的人上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞中的UPA、MMP2及MMP9等和侵襲密切相關(guān)因子基因的表達(dá)。
　　實驗結(jié)果:
　　1.bFGF對SKOV3細(xì)胞增殖的影響:MTT實驗結(jié)果表明: bFGF能促進(jìn)SKOV3細(xì)胞增殖，隨著bFGF的濃度增加，對SKOV3細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用增強，當(dāng)bFGF濃度達(dá)到10ng/m

3、l時，其增殖率達(dá)60％以上，當(dāng)bFGF濃度為100 ng/ml時，其促增殖效率達(dá)到100％以上。
　　2.P7對SKOV3細(xì)胞形態(tài)及增殖的影響:倒置顯微鏡下觀察到作用濃度范圍內(nèi)的P7組與空白組細(xì)胞形態(tài)無明顯區(qū)別。MTT實驗結(jié)果顯示P7在檢測濃度梯度范圍內(nèi)(0.25μM、1μM、4μM、16μM)對SKOV3細(xì)胞生長無促進(jìn)增殖或抑制作用。
　　3.P7抑制bFGF刺激的卵巢癌SKOV3細(xì)胞的增殖:MTT實驗結(jié)果表明P7在檢測濃

4、度梯度范圍內(nèi)(0.25μM、1μM、4μM、16μM)能明顯抑制由bFGF(10ng/mL)誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖，并隨著P7濃度增加，對SKOV3細(xì)胞增殖的抑制作用增強，當(dāng)P7濃度達(dá)到4μM，其抑制率達(dá)90％左右，當(dāng)P7濃度為16μM時，其抑制率達(dá)到95％以上。
　　4.P7對bFGF刺激的SKOV3細(xì)胞的遷移能力的影響:0.4％FBS空白對照組與單純P7組(4μM)組細(xì)胞向空白區(qū)域遷移速度相似，兩者間無統(tǒng)計學(xué)差異。bFGF(10ng/

5、ml)組細(xì)胞遷移速度最快，24小時后細(xì)胞匯合成片。P7(4μM)+bFGF(10ng/ml)組細(xì)胞遷移速度最慢，這兩組分別與空白組之間比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　5.P7對bFGF刺激的人上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3細(xì)胞中的UPA、MMP2及MMP9mRNA基因表達(dá)的影響:實驗共分為4組:空白對照組、P7組、P7+bFGF組及bFGF組。實時熒光定量PCR(qRT-PCR)結(jié)果表明:1）bFGF(10ng/ml)

6、組中UPA mRNA基因表達(dá)水平為(6.123±0.718)，MMP2 mRNA基因表達(dá)量為(3.622±0.887)，MMP9 mRNA基因表達(dá)量為(2.838±0.836)，分別與其余三組兩兩比較，bFGF組基因表達(dá)明顯升高，其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);2) P7(4μM)+bFGF(10ng/ml)組中UPA mRNA基因表達(dá)水平為(0.301±0.078)，MMP2 mRNA基因表達(dá)量為(0.261±0.082)，MM

7、P9 mRNA基因表達(dá)量為(0.287±0.069)，分別與其余三組兩兩比較，P7組基因表達(dá)量最少，其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);3) P7(4μM)組各基因表達(dá)量UPA mRNA基因表達(dá)水平為(1.009±0.202)，MMP2 mRNA基因表達(dá)量為(1.036±0.204)，MMP9 mRNA基因表達(dá)量為(1.044±0.224)。單純的P7組與空白對照組相比其基因表達(dá)量相似，其差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。