設施辣椒根腐病病原鑒定及檢測技術研究.pdf

1、近年來,由于設施辣椒栽培面積的連年擴大,輪作倒茬越來越困難,辣椒根腐病已經成為我國北方設施辣椒可持續(xù)發(fā)展的限制性因子之一.本論文針對辣椒根腐病病原不清,防治藥劑不得當引起防效差的問題,開展了設施辣椒根腐病病原鑒定及檢測技術研究.1.對來自北京陽坊、山東壽光、遼寧瓦房店等地不同辣椒產區(qū)的根腐病病原進行了分離培養(yǎng)和鑒定,根據其形態(tài)特征、培養(yǎng)性狀、生化特性以及致病性測定結果,將該病原菌鑒定為辣椒疫霉Phytophthora capsici L

2、eonion.病原菌具孢子囊,形態(tài)變化大,橢圓形、近球形、卵形或不規(guī)則形,孢子囊平均大小為(11.8～46.6)×(11.2～24.5)μm,長寬比為1.4～1.8;乳突明顯,呈半球形,一般單乳突,偶見雙乳突,乳突長為1.7～5.9μm;病原菌不產生厚垣孢子;除辣椒外,人工接種還可侵染黃瓜、番茄、茄子,不侵染油菜和白菜;對孔雀石綠不敏感,能夠利用淀粉.2.運用免疫學技術,建立了檢測辣椒疫霉的間接ELISA(I-ELISA)和斑點ELIS

3、A(Dot-ELISA)方法.本研究首先以辣椒疫霉菌體可溶性蛋白作為免疫原,通過免疫家兔制備了高效價的抗血清,并進一步提取和純化了抗體IgG.在實驗室條件下從樣品稀釋度、抗體孵育時間、抗體工作濃度、酶標二抗孵育時間、酶標二抗工作濃度等幾個方面對I-ELISA和Dot-ELISA檢測方法進行了實驗條件的優(yōu)化.結果顯示,在間接ELISA法中,最佳封閉液及封閉時間分別為0.5﹪的BSA和37℃2h;抗體最佳工作濃度及孵育時間分別為16.67μ

4、g/mL和37℃ 1.5h;酶標二抗的最佳工作濃度及孵育時間分別為800×和37℃2h;底物顯色的最佳作用時間為37℃15min.在Dot-ELISA法中,抗體最佳工作濃度為8.69μg/mL,抗原抗體間的最佳作用時間為37℃1.5～2.0h,酶標二抗的最佳工作濃度和孵育時間分別為600倍和37℃1.5h.以上兩種檢測方法的穩(wěn)定性好、特異性強,檢測的靈敏度高,可用于田間實際檢測. 本研究首次鑒定了引起我國北方地區(qū)辣椒根腐病的病原