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文檔簡(jiǎn)介
1、研究目的:研究用甲基化特異性PCR(MS-PCR)法檢測(cè)CRC、結(jié)直腸息肉、正常人糞便DNA中MAL、CDKNA2A、MGMT基因啟動(dòng)子甲基化情況對(duì)結(jié)直腸腫瘤的篩查作用及相關(guān)基因高甲基化與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系。同時(shí)評(píng)價(jià)試劑盒法對(duì)糞便DNA的提取純化作用。 研究方法:收集2008年9月至2009年1月期間在長(zhǎng)海醫(yī)院普二科住院的結(jié)直腸癌、結(jié)直腸息肉及正常對(duì)照病人的糞便標(biāo)本,并整理記錄病例的臨床病理資料,采用糞便細(xì)胞DNA提取試
2、劑盒提取糞便DNA并在驗(yàn)證人基因組DNA存在后,使用MSP檢測(cè)糞便DNA中相關(guān)基因啟動(dòng)子甲基化情況。 結(jié)果:共提取糞便DNA144例,最終驗(yàn)證存在人基因組DNA并完成MSP144例,其中CRC組、結(jié)直腸息肉組和正常對(duì)照組各為69例,49例和26例。CRC患者糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動(dòng)子甲基化率為78.3%、52.3%、55.1%,特異性分別為72%、84%、85.3%,92.7%的CRC患者糞便中至少有一
3、個(gè)基因可以檢測(cè)到高甲基化,特異性62.6%;進(jìn)展期腺瘤(>1cm、伴有上皮內(nèi)瘤變、絨毛狀腺瘤或管狀絨毛狀腺瘤)患者糞便糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動(dòng)子甲基化率為72.7%、54.5%、45.5%,81.8%的進(jìn)展期腺瘤患者糞便中至少有一個(gè)基因可以檢測(cè)到高甲基化;非進(jìn)展期腺瘤患者糞便糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動(dòng)子甲基化率為46.2%、30.8%、30.8%,61.5%的非進(jìn)展期腺瘤患者糞便中至少有
4、一個(gè)基因可以檢測(cè)到高甲基化;鋸齒狀腺瘤(本院病理科診斷名稱為混合型增生性腺瘤性息肉)患者糞便糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動(dòng)子甲基化率為50.0%、16.7%、33.3%,66.7%的鋸齒狀腺瘤患者糞便中至少有一個(gè)基因可以檢測(cè)到高甲基化:增生性息肉患者糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動(dòng)子甲基化率為26.3%、15.8%、10.5%,42.1%的增生性息肉患者糞便中至少有一個(gè)基因可以檢測(cè)到高甲基化;正常對(duì)
5、照患者糞便糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動(dòng)子甲基化率為3.8%、0%、3.8%,分別在正常對(duì)照組中檢測(cè)到1例MAL和MGMT高甲基化。檢測(cè)糞便中MAL、CDKN2A、MGMT基因甲基化對(duì)于Ⅰ-Ⅱ期結(jié)直腸癌和癌前病變(進(jìn)展期腺瘤)的發(fā)現(xiàn)率分別為73.8%、54.8%、52.496,聯(lián)合檢測(cè)3個(gè)基因甲基化對(duì)Ⅰ-Ⅱ期結(jié)直腸癌和癌前病變(進(jìn)展期腺瘤)的發(fā)現(xiàn)率88.1%。結(jié)直腸癌糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動(dòng)
6、子甲基化與結(jié)直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期均無(wú)相關(guān)性。 結(jié)論:試劑盒法提取純化糞便DNA可靠性高。糞便DNA中MAL、CDKN2A和MGMT基因啟動(dòng)子甲基化情況與結(jié)直腸癌患者性別、年齡、腫瘤部位、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。用MSP法檢測(cè)糞便中MAL、CDKN2A和MGMT基因啟動(dòng)子甲基化是檢測(cè)早期CRC及癌前病變結(jié)直腸癌篩查的無(wú)創(chuàng)的高敏感性方法,聯(lián)合分析MAL、CDKN2A和MGM
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