口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用.pdf

1、本研究制備了3ABC蛋白的單克隆抗體，建立了針對(duì)口蹄疫(FMD)的非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC的單抗捕獲ELISA和競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法。經(jīng)臨床試驗(yàn)證明，這兩種方法均具有較高的敏感性和特異性，可以用于臨床檢測(cè)。具體研究情況如下： 1．口蹄疫3ABC蛋白單克隆抗體的制備 以純化的3ABC蛋白為免疫原，免疫Balb/C小鼠，將脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合，用間接ELISA方法篩選，采用有限稀釋法對(duì)其進(jìn)行克隆，經(jīng)過(guò)3次融合共獲得3株能

2、穩(wěn)定分泌抗3ABC蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為1D1，1E2,2E3。三株單抗的腹水效價(jià)分別為2<'11>×100，2<'11>×100，2<'10>×100。所有單抗特異性良好，與載體蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。 2．單抗捕獲ELISA的建立和初步應(yīng)用 以單抗1D1包被酶標(biāo)板，再加入粗提的3ABC蛋白，通過(guò)單抗捕獲3ABC蛋白，建立了3ABC單抗捕獲ELISA方法。用方陣滴定確定單抗?jié)舛葹?：2000，蛋白最佳濃度是2

3、.1μg/ml，最佳血清稀釋倍數(shù)為1:400，通過(guò)測(cè)定160份FMDV陰性血清，確定了該方法的陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。特異性、重復(fù)性及臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法特異性強(qiáng)、重復(fù)性好。與國(guó)外同類(lèi)試劑盒的比較試驗(yàn)，共檢測(cè)血清184份，兩者均檢測(cè)為陽(yáng)性14份，均檢測(cè)為陰性165份，符合率97.28％；與國(guó)內(nèi)同類(lèi)試劑盒的比較試驗(yàn)，共檢測(cè)血清168份，兩者均檢測(cè)為陽(yáng)性3份，均檢測(cè)為陰性159份，符合率95.83％。 3．競(jìng)爭(zhēng)ELISA的建立和初步應(yīng)用