Th17細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子在幽門螺桿菌感染中的作用研究.pdf

1、目的:通過建立幽門螺桿菌(H. pylori)感染的C57BL/6小鼠模型,分析感染后不同時期小鼠胃組織IL-17、IL-23 mRNA及蛋白表達(dá)情況,以及脾臟單細(xì)胞懸液中Th17細(xì)胞應(yīng)答情況,并分析感染后胃炎的嚴(yán)重程度與Th17-IL-17應(yīng)答效應(yīng)的相關(guān)性,同時設(shè)立治療組檢測上述指標(biāo)的變化情況。為探討 IL-23/IL-17信號通路在H. pylori感染中的作用奠定基礎(chǔ),為H. pylori誘發(fā)的胃炎的免疫防御及治療提供新的理論和實

2、驗依據(jù)。
　　方法:
　　(1)對6~8周齡的C57BL/6小鼠進(jìn)行灌胃感染H. pylori,每隔48小時一次,共灌胃5次。在H. pylori感染后的4、8、12周分別處死小鼠,鑒定H. pylori感染小鼠模型是否成功。同時設(shè)立治療組,采用三聯(lián)療法對灌胃感染4周后的小鼠進(jìn)行治療;
　　(2)對對照組、感染組、治療組小鼠分別取部分胃組織作H﹠E染色,顯微鏡下觀察胃組織炎癥變化;
　　(3)采用Trizol法對

3、胃組織及脾細(xì)胞提取RNA,RT-PCR檢測細(xì)胞因子IL-17、IL-23 mRNA的表達(dá)情況;
　　(4) ELISA檢測胃組織勻漿上清中細(xì)胞因子IL-17、IL-23蛋白含量;
　　(5)采用PMA+Ionomycin或H. pylori WCP對脾淋巴細(xì)胞進(jìn)行刺激培養(yǎng),流式細(xì)胞術(shù)檢測脾臟單細(xì)胞懸液中Th17細(xì)胞應(yīng)答情況。
　　結(jié)果:
　　(1)成功建立了H. pylori感染小鼠模型,感染組小鼠胃黏膜炎癥程度

4、隨感染時間的延長而不斷加重;
　　(2)與對照組相比,H. pylori感染組小鼠的胃組織中IL-17、IL-23的表達(dá)在mRNA及蛋白水平均顯著增高,H. pylori感染組小鼠的脾淋巴細(xì)胞中Th17細(xì)胞比例顯著高于對照組小鼠的該比值;
　　(3) H. pylori感染組小鼠IL-17、IL-23 mRNA及蛋白含量以及脾淋巴細(xì)胞中Th17細(xì)胞比例隨感染時間延長而增加;
　　(4)治療組小鼠IL-17、IL-23表

5、達(dá)量及脾淋巴細(xì)胞中Th17細(xì)胞比率,與治療前即感染后4周的小鼠相比較均有所下降;
　　(5)感染后不同時期小鼠胃黏膜的炎癥程度與IL-17、IL-23的表達(dá)量存在正相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　(1) H. pylori感染后IL-17、IL-23表達(dá)均上調(diào);
　　(2) H. pylori感染后可以誘導(dǎo)Th17細(xì)胞應(yīng)答;
　　(3) H. pylori感染后胃炎程度與胃組織IL-17、IL-23含量存在正相關(guān)。