人血小板冷凍干燥保存的實驗研究.pdf

1、血小板輸注在臨床上的應用越來越廣泛，提高血小板體外保存時間和質(zhì)量成為輸血醫(yī)學的研究熱點之一。冷凍干燥法具有室溫下長期保存、復水后迅速恢復活性、重量輕便于運輸?shù)葍?yōu)點，為血小板的長期保存提供了一種理想的方法。但是，目前血小板的冷凍干燥保存技術還有許多未解決的問題，離臨床醫(yī)學的應用還有很大的距離。本文在國家自然科學基金項目“超聲波在生物材料玻璃化保存中的應用”（項目編號：50076039）及衛(wèi)生部科學研究基金項目“血小板凍干保存方法的研究”（

2、項目編號：WKJ2005-2-037）的資助下，采用冷凍干燥的方法保存血小板，以提高冷凍干燥血小板的存活率為目標，進行了以下研究工作： 自行研制了一套實驗型冷凍干燥裝置，首次將新型自動復疊循環(huán)用于冷凍干燥裝置的制冷系統(tǒng)，成功地用單級壓縮機系統(tǒng)使擱板溫度達到-60℃，冷阱溫度達到-80℃。該裝置溫度、壓力、質(zhì)量的測量和控制功能齊全，彌補了現(xiàn)有實驗型凍干裝置存在的不足，為血小板的冷凍干燥實驗提供了必要的實驗條件。 采用差示掃

3、描量熱技術測量血小板凍干懸浮液和凍干樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度，并對影響血小板凍干懸浮液和凍干樣品玻璃化轉(zhuǎn)變溫度的因素進行分析，為制定合理的凍干工藝提供依據(jù)。牛血清白蛋白的加入提高了凍干懸浮液及凍干樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度。海藻糖濃度的增加使凍干懸浮液的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度顯著升高，凍干樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度略有升高。海藻糖、乳糖、麥芽糖凍干懸浮液及凍干樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度較高且相差不大，蔗糖次之，而葡萄糖凍干懸浮液及凍干樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度遠低于其他幾

4、種糖。血小板濃度對凍干懸浮液及凍干樣品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度幾乎沒有影響。除了含20％葡萄糖的配方外，血小板凍干配方溶液的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度最低為-36.2℃，凍干粉的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度最低為35.3℃，因此，確定在血小板冷凍干燥的實驗中凍結溫度為-40℃，升華干燥溫度為-38℃，貯存溫度為低于30℃的室溫。 采用熱穿孔方法通過溫度控制的液相內(nèi)吞途徑將海藻糖載入血小板。在此基礎上，檢驗細胞內(nèi)海藻糖和細胞外保護劑在血小板凍干保存中分別所起的作用

5、。在細胞外海藻糖濃度為50mmol/L，孵化溫度37℃，孵化時間4h的優(yōu)化條件下，血小板內(nèi)部的海藻糖濃度達到約15mmol/L。在細胞內(nèi)海藻糖濃度為15mmol/L，細胞外保護劑為1％牛血清白蛋白及1％海藻糖的情況下凍干血小板，實驗結果證明了僅細胞外保護劑能夠得到較高的凍干血小板數(shù)值恢復率，細胞外保護劑在血小板凍干保存過程中起到主要的保護作用，而15mmol/L細胞內(nèi)海藻糖自身不足以提供血小板的凍干保護，只是在細胞外保護劑提供主要保護作

6、用的基 礎上起輔助作用。這一結果為簡化血小板凍干操作工藝的研究提供了方向。 研究保護劑系統(tǒng)、降溫速率、血小板濃度三種影響因素對血小板冷凍干燥保存效果的影響，通過比較冷凍干燥保存后血小板的恢復率，確定這三種影響因素的優(yōu)化參數(shù)。在實驗條件范圍內(nèi)，最佳凍干保護劑組合是1％牛血清白蛋白和20％海藻糖，最佳凍結速度約為10℃/min，最佳凍干血小板初始濃度范圍0.5×10<'9>～2.3×10<'9>個/ml。優(yōu)化條件下，凍干復水后