可溶性CD40L在兒童特發(fā)性血小板減少性紫癜發(fā)病機制中的作用研究.pdf

1、研究背景和目的：特發(fā)性血小板減少性紫癜(Idiopathicthrombocytopenicpurpura，ITP)是兒科常見的出血性疾病，發(fā)病機制復雜，至今尚未完全闡明。早在50年代人們就發(fā)現(xiàn)ITP患者的血液中產(chǎn)生了針對自身血小板的抗體，1951年Harrington等發(fā)現(xiàn)ITP是由一種能通過胎盤的體液因子引起，將ITP患者的血漿輸給正常個體，能使正常個體血小板減少；Shulman等隨后研究發(fā)現(xiàn)，抗血小板因子是一種免疫球蛋白；1975

2、年Dixon等首次用定量方法檢測了血小板表面的免疫球蛋白，稱為血小板相關抗體(PAIg)(Ⅱ期測定)，而該抗體與血小板膜gpⅡb/Ⅲa、gpⅠb/Ⅸ等自身抗原有交叉抗原抗體反應，而導致血小板破壞增多。大量研究證實，抗血小板抗體在ITP的發(fā)病中起到關鍵的作用。 目前認為ITP的發(fā)病機制系在一定的遺傳素質的基礎上，在有關誘因的作用下使機體免疫功能紊亂，特別是T細胞活性過度增強，B細胞多克隆激活，產(chǎn)生抗血小板的自身抗體，使血小板在網(wǎng)狀

3、內皮系統(tǒng)內破壞，從而引起血小板減少，產(chǎn)生各種臨床癥狀。免疫反應的發(fā)生依賴于T細胞的活化，而T細胞的活化除了需要抗原-MHC復合物信號外，還需要有第二信號刺激，即抗原非特異性共刺激分子的協(xié)同。若缺乏共刺激分子，則T細胞不能被有效的激活，而進入無反應狀態(tài)或免疫耐受，若共刺激分子過度表達，則可激活自身反應性T細胞，導致自身免疫性疾病的發(fā)生。 近年來，隨著免疫學，分子遺傳學技術的發(fā)展，人們對共刺激分子的認識越來越深刻，其與ITP之間的關

4、系也日益引起人們的重視；其中B7家族是公認的重要的共刺激分子，但許多研究結果顯示僅僅阻斷該途徑還不能抑制自身特發(fā)性疾病、移植排斥反應及移植物抗宿主反應的發(fā)生，CD40/CD40L作為另一條重要的共刺激途徑引起了人們廣泛的關注。 本研究通過測定ITP患兒外周血血漿中可溶性CD40L(sCD40L)水平，抗血小板抗體的水平及單個核細胞中sCD40LmRNA的表達水平，來探討CD40/CD40L與ITP發(fā)病機制的關系，為臨床應用抗CD

5、40L單抗提供實驗依據(jù)。 材料和方法ITP患兒30例，其中又分為aITP和cITP，于治療前及應用激素，丙種球蛋白治療后血小板升至正常時(血小板計數(shù)＞100×109/L)各收集外周血標本一份。收集30例健康體檢兒童的外周血標本作為對照組，同時記錄其發(fā)病時間、年齡、性別等臨床資料。采用ELISA法分別測出血漿中sCD40L和PAIgG的濃度，密度梯度離心法分離出單個核細胞，提取細胞總RNA,逆轉錄成cDNA并進行PCR擴增，測定I

6、TP患兒與正常對照者sCD40LmRNA的表達水平。統(tǒng)計分析采用兩樣本均數(shù)比較的顯著性檢驗-t檢驗及相關性分析，以a=0.05作為顯著性水準。 結果1.ITP患兒治療前外周血sCD40L的濃度與正常人相比顯著增高(p＜0.05)，治療后ITP患兒外周血sCD40L的水平較治療前顯著降低(p＜0.05)；sCD40L的水平與臨床分型無關；若數(shù)值大于正常人的均數(shù)+2標準差視為陽性，則sCD40L陽性病人血小板數(shù)顯著降低，血小板抗體I