24周補(bǔ)充活性維生素D對(duì)慢性腎衰竭大鼠腎臟足細(xì)胞維生素D受體表達(dá)及Wnt-β-catenin-snail信號(hào)通路活性的影響.pdf

1、目的：慢性腎臟病(CKD)是危害全世界公共衛(wèi)生健康的重大疾病。CKD患者普遍存在活性維生素D不足或缺乏?；钚跃S生素D不僅通過(guò)調(diào)節(jié)腎臟、骨、甲狀旁腺功能，維持鈣磷及骨代謝平衡，還有獨(dú)立于鈣磷代謝調(diào)節(jié)的腎臟保護(hù)作用。臨床和實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，短期補(bǔ)充活性維生素D(1，25(OH)2D3)可保護(hù)足細(xì)胞，減輕蛋白尿，延緩。腎衰竭進(jìn)展，但其長(zhǎng)期作用尚未明確。本研究采用5/6腎切除方法制備慢性腎衰竭模型大鼠，觀察長(zhǎng)期(24w)給予1，25(OH)2D3對(duì)

2、大鼠蛋白尿、腎功能及足細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的影響。
　　方法：12只體重在180-200g的雄性Sprague-Dawley大鼠，經(jīng)5/6腎切除手術(shù)制備慢性腎衰竭模型。隨機(jī)分為慢性腎衰竭模型組(D組，n=6)、慢性腎衰竭+1，25(OH)2D3組(C組，n=6)，同時(shí)制備假手術(shù)組，僅剝離腎包膜(N組，n=6)。C組手術(shù)3w后開始給予1，25(OH)2D3，3ng/100g/d，腹腔注射，共24w。于術(shù)后3、12、24w取血清并留取24小

3、時(shí)尿，檢測(cè)三組大鼠血清肌酐(SCr)，尿蛋白(UP)、尿肌酐(UCr)。24w處死大鼠，取腎組織，行常規(guī)病理和電鏡檢查，觀察腎組織和足細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變。免疫組化法檢測(cè)腎小球維生素D受體(VDR)、podocalyxin、β-catenin及Snail表達(dá)水平改變，并分析其與蛋白尿、腎功能改變的關(guān)系。
　　結(jié)果：(1)3w～24w，C組、D組SCr及UP較N組明顯增高(均P<0.05)。24w時(shí)，與D組比較，C組SCr明顯降低、UP

4、明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p<0.05)。3w～24w，C組、D組肌酐清除率(Ccr)均明顯低于N組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，而前兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。3w～24w，三組大鼠血清鈣、磷水平比較均無(wú)顯著差異(均p>0.05)。(2)病理檢查顯示，與N組比較，C組、D組大鼠。腎小球硬化指數(shù)明顯增加(p<0.05)，但C組較D組明顯減輕(p<0.05)。電鏡檢查發(fā)現(xiàn)，C組較D組足細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損害明顯減輕。免

5、疫組化法證實(shí)，N組大鼠VDR表達(dá)方式與podocalyxin相似，主要表達(dá)于足細(xì)胞，腎小球無(wú)明顯β-catenin、Snail表達(dá)。在D、C組，腎小球podocalyxin、VDR表達(dá)明顯減少(均p<0.05)，β-catenin、Snail表達(dá)明顯增加(均p<0.05)，仍主要位于足細(xì)胞。與D組比較，C組大鼠腎小球足細(xì)胞podocalyxin、VDR表達(dá)上調(diào)(均p<0.05)，β-catenin、Snail表達(dá)明顯下調(diào)(均p<0.05

6、)。相關(guān)分析表明，VDR表達(dá)與足細(xì)胞podocalyxin呈正相關(guān)，VDR表達(dá)與蛋白尿、SCr呈負(fù)相關(guān)；足細(xì)胞β-catenin表達(dá)與蛋白尿、SCr呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：1、長(zhǎng)期(24w)給予活性維生素D可以使慢性腎衰竭大鼠尿蛋白水平明顯減少、血肌酐水平明顯降低、腎小球硬化程度明顯減輕，對(duì)腎臟具有一定保護(hù)作用。2、長(zhǎng)期(24w)活性維生素D干預(yù)可以明顯抑制慢性腎衰竭所致大鼠足細(xì)胞podocalyxin及VDR表達(dá)水平的下調(diào)。3、長(zhǎng)