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文檔簡介
1、雞傳染性支氣管炎(IB)是由傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的雞的急性、高度接觸性的呼吸道和泌尿生殖道疾病。雞傳染性支氣管炎病毒的常規(guī)檢測方法是利用雞傳染性支氣管炎病毒總蛋白做為抗原,通過酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)來檢測IBV抗體。然而,病毒總蛋白的制備繁瑣耗時。雞傳染性支氣管炎的病毒中,病毒結(jié)構(gòu)蛋白包括纖突蛋白(S)、核蛋白(N)、膜蛋白(M)。其中,S蛋白與中和作用相關(guān)。因此,本試驗克隆并表達S的部分保守基因片段(Sp),建立了
2、以Sp蛋白為抗原的IBV抗體間接ELISA檢測方法,為IBV ELISA診斷試劑盒的研制奠定了基礎(chǔ)。 以提取的IBV總RNA為模板,根據(jù)原核表達載體pET-His設(shè)計含有BamHI和HidⅢ酶切位點的引物,通過RT-PCR的方法克隆擴增出Sp基因。將擴增出的Sp基因以及空表達載體pET-His進行BamHI和HidⅢ雙酶切,然后將Sp基因克隆于原核表達載體pET-His。將重組表達載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21進行誘導(dǎo)表達。重組蛋
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