安宮牛黃鼻用腦靶向制劑的研究.pdf

1、安宮牛黃丸是傳統(tǒng)中藥中的經(jīng)典急救方，臨床上用來治療高熱、昏迷、中風(fēng)等中樞性急重癥，目前常用劑型有丸劑、散劑和簡化方的注射劑等，但這幾種給藥方式都具有一定的局限性。鼻腔給藥途徑是近年來研究較多的給藥系統(tǒng)之一，其吸收迅速、給藥方便，此外還可用作腦內(nèi)靶向的遞藥手段。為了改善患者的順應(yīng)性，充分發(fā)揮急救方的療效，探索安宮牛黃丸經(jīng)鼻腦靶向給藥系統(tǒng)的可行性，本研究在對9味原藥材不同前處理的基礎(chǔ)上，確定了安宮牛黃鼻用制劑的處方，重點對安宮牛黃丸中起中樞

2、解熱的重要物質(zhì)基礎(chǔ)--黃芩苷的經(jīng)鼻給藥后，鼻-腦通路的存在與否、處方因素、劑型因素以及其吸收機制做了詳細探索，在制備出黃芩苷載藥脂質(zhì)微球的基礎(chǔ)上，制備一種載有多種成分的安宮牛黃鼻用腦靶向雙相載藥脂質(zhì)微球。 本文首先建立了黃芩苷、梔子苷、姜黃素、鹽酸小檗堿、膽酸、冰片、膽紅素的體外分析方法，分別對梔子原藥材進行了提取，測定了提取物中梔子苷的含量；對人工牛黃進行乙醇提取，測定了醇提物中膽酸的含量，計算了提取物的收率；測定了黃芩苷在水

3、中的溶解度；制備了姜黃素包合物并以DSC法進行驗證，測定了包合物的溶解度和姜黃素在包合物中的含量；測定了冰片的含量并制備了麝香酮和冰片混合物的隨機甲基化-β-環(huán)糊精包合物水溶液；對水牛角和珍珠粉進行了水解，計算了收率。最后根據(jù)各種提取物或中間產(chǎn)物中各指標性成分的含量確定了安宮牛黃鼻用制劑的處方。 采用大鼠在體鼻腔灌流模型(insituratnasalperfusionmethod)初步考察了梔子苷、鹽酸小檗堿、姜黃素和黃芩苷的鼻

4、腔吸收情況。除梔子苷外，黃芩苷、姜黃素和鹽酸小檗堿吸收均比較明顯，此后重點研究了黃芩苷的鼻腔吸收規(guī)律和吸收促進劑對其鼻腔吸收的促進作用，結(jié)果表明，黃芩苷鼻腔吸收符合一級吸收動力學(xué)，不同添加劑對其吸收的促進作用存在以下關(guān)系：1％去氧膽酸鈉>>0.5％殼聚糖≈0.5％冰片≈5％甲基化-β-環(huán)糊精>5％HP-β-CD>5％β-CD>1％Tween80≈0.1％EDTA-Na2≈1％磷脂，其中加入最后三者的促吸收效果與不加吸收促進劑時無顯著性差

5、異。 建立了大鼠給藥后腦滲析和血液滲析同時采集腦脊液樣品和血漿樣品的方法，分別以零凈流量法和反向滲析法測定了兩部位滲析的體內(nèi)和體外回收率，其中腦部和血漿中探針的體內(nèi)回收率分別為17.52％和15.0％。此外，建立了UPLC-MS/MS法測定大鼠滲析液中黃芩苷的分析方法。隨后對四種黃芩苷鼻用溶液劑，即pH5.4組(IN1)、pH4.9組(IN2)、5％隨機甲基化-β-環(huán)糊精組(IN3)以及1％冰片組(IN4)，及一靜脈注射給藥組(

6、Ⅳ1)分別進行了大鼠血漿中和腦脊液中的藥物動力學(xué)研究，劑量均為12mg·kg-1，DAS2.0藥代動力學(xué)軟件非隔室模型處理體內(nèi)數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，黃芩苷靜脈注射后具有微弱的血腦屏障透過能力，經(jīng)鼻給藥后，黃芩苷血漿中游離藥物濃度遠低于靜注后的血藥濃度，且達峰時間有明顯的滯后，CSF中的濃度水平與靜注后相當，提示黃芩苷的實際鼻腔吸收效果并不理想。IN1、IN2、IN3和IN4四種鼻用溶液劑血漿中的生物利用度分別為11.7％、12.5％、21.0

7、％和11.0％，高低順序依次為IN3>IN2>IN1>IN4，其中由于環(huán)糊精的促吸收作用，IN3的生物利用度最高，與其他三者間存在顯著性差異；腦內(nèi)生物利用度分別為69.3％、58.2％、89.0％和72.5％，高低順序依次為IN3>IN4>IN1>IN2，加入環(huán)糊精的制劑雖然在腦脊液中的達峰時間延遲，但入腦量最高，腦靶向性指數(shù)(DTI)和腦部藥物直接轉(zhuǎn)運百分比(DIP)計算結(jié)果表明黃芩苷可經(jīng)嗅覺通路入腦，存在鼻-腦通路。 以反應(yīng)

8、溶劑、藥脂比例為考察項，確定黃芩苷磷脂復(fù)合物的制備工藝為：黃芩苷：磷脂1：5(w/w)，室溫下四氫呋喃中反應(yīng)3小時，蒸發(fā)除去溶劑即得。利用DSC和X-射線衍射技術(shù)確證分析了黃芩苷磷脂復(fù)合物的形成以及藥物和磷脂兩者間可能存在的相互作用。采用高壓均質(zhì)法制備了黃芩苷脂質(zhì)微球，以復(fù)合物在油中溶解狀態(tài)、穩(wěn)定性常數(shù)Ke、粒度分布、ζ-電位和包封率確定了黃芩苷脂質(zhì)微球的最終處方和工藝為：按質(zhì)量百分比，油相組成為：磷脂復(fù)合物以黃芩苷計為1％、中鏈油(M

9、CT)為20％、外加豆磷脂1％、油酸0.06％，水相組成為：甘油2.5％、F-681％、EDTA0.006％，制備初乳后，高壓均質(zhì)參數(shù)為700bar壓力下循環(huán)7次，均質(zhì)前調(diào)節(jié)pH值至5.0。大鼠體內(nèi)藥動學(xué)研究表明，黃芩苷鼻用脂質(zhì)微球(2.4mg·kg-1)經(jīng)鼻吸收后其血漿中生物利用度為55.2％，腦脊液中為227％，分別為溶液劑組(IN1，pH5.4)的5倍和3倍。由AUCCSF/AUCplasma計算結(jié)果可知，相比于溶液劑，脂質(zhì)微球組

10、的腦靶向指數(shù)有所降低。 根據(jù)黃芩苷鼻用脂質(zhì)微球的處方工藝以及安宮牛黃鼻用制劑的處方，制備安宮牛黃鼻用腦靶向脂質(zhì)微球，測定了其粒度分布和穩(wěn)定性常數(shù)Ke，并以黃芩苷計對包封率和載藥量進行了測定。以在體蟾蜍上顎粘膜法評價了安宮牛黃鼻用溶液劑和安宮牛黃鼻用脂質(zhì)微球的蟾蜍上顎纖毛毒性，與陰性對照相比，兩制劑組均有比較明顯的纖毛毒性。以生化指標法評價了處方中使用較多的吸收促進劑兼增溶劑--隨機甲基化-β-環(huán)糊精的鼻粘膜毒性，結(jié)果顯示，5％的