小劑量氫化可的松對大鼠肺內(nèi)源性急性肺損傷療效的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 1.建立大腸桿菌導(dǎo)致的肺內(nèi)源性ALI/ARDS大鼠模型。2.利用上述模型觀察小劑量氫化可的松對ALI/ARDS的療效。3.觀察ALI早期補(bǔ)充小劑量氫化可的松對模型大鼠生存狀態(tài)影響，為臨床應(yīng)用氫化可的松提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料、方法：分3步進(jìn)行。 1.建立ALI/ARDS動物模型： 分兩步進(jìn)行，第一步是觀察感染動物病情變化，共72h；第二步是將72h劃分為5個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行多項(xiàng)指標(biāo)觀察。 1.1感染

2、動物方法： 健康雄性Wistar大鼠。經(jīng)麻醉后，頸正中切口暴露氣管，經(jīng)氣管滴入3ml/kg大腸桿菌混懸液。術(shù)畢縫合傷口，放開動物，自由飲食。 1.2模型大鼠病情觀察： 29只大鼠隨機(jī)分為2組，模型組(n=21)，分3次觀察，每次7只，經(jīng)氣管滴入3ml/kg大腸桿菌混懸液。生理鹽水組(NS組，n=8)，分2次觀察，每次4只，經(jīng)氣管滴入3ml/kg NS。連續(xù)觀察72小時(shí)，記錄大鼠病情變化和死亡時(shí)間。1.3分時(shí)間點(diǎn)觀

3、察： 2.觀察小劑量氫化可的松對ALI/ARDS療效： 感染動物方法同上，12小時(shí)后將存活58只大鼠隨機(jī)分為氫化可的松干預(yù)組(HC組，共28只，其中12h 9只、24h 9只、36h 10只)、模型對照組(C組，不予治療，共30只，12、24、36h各10只)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，放血處死動物，左肺稱重計(jì)算肺指數(shù)，右肺灌洗留取BALF，BCA法測BALF總蛋白含量，ELISA法測BALF及血清中TNF-α、IL010、IL-8濃度

4、。左肺常規(guī)固定做病理檢查進(jìn)行病理損傷評分。 3.急性肺損傷早期補(bǔ)充小劑量氫化可的松對大鼠生存狀況的影響肺部感染大腸桿菌12h后存活的33只Wistar大鼠，隨機(jī)分為HC組16只，腹腔注射氫化可的松5mg/kg；C組17只，腹腔注射NS 5ml/kg。動物自由飲食，連續(xù)觀察72h內(nèi)大鼠死亡情況。 結(jié)果： 1.動物模型觀察： 1.1大鼠在感染6h后呼吸急促，8h開始有大鼠死亡；72h后大鼠病情開始恢復(fù)。死亡1

5、1只，發(fā)生在8h到40h之間，病死率52.38％，NS組無死亡。 1.2分時(shí)間點(diǎn)觀察。 1.2.1機(jī)械通氣30min時(shí)心肺功能。 1.2.2病理學(xué)改變：隨著肺部感染細(xì)菌時(shí)間的延長，肺組織病變逐漸明顯。肺體積增加，肺門充血、實(shí)變，逐漸發(fā)展到肺部出血、壞死、膿瘍病灶。肺組織切片由肺內(nèi)少量滲出液到肺泡壁明顯水腫，大量炎癥細(xì)胞浸潤，肺泡壁破壞、肺泡腔內(nèi)出現(xiàn)大量滲出液和炎癥細(xì)胞，透明膜形成以及嚴(yán)重肺泡萎陷。72h開始進(jìn)入恢

6、復(fù)階段，病灶吸收纖維化。 2.小劑量氫化可的松對ALI療效觀察： 2.1血液動力學(xué)、肺功能變化：①血壓：12、24、36h HC組分別為(15.47±1.33)kpa、(16.64±1.14)kpa、(17.21±2.41)kpa，C組分別為(13.96±1.37)kpa、(14.94±1.37)kpa、(14.97±0.93)kpa HC組均明顯高于C 組(P<0.05)。②ALI/ARDS發(fā)生率：HC、C組相比，12

7、hALI發(fā)生率分別為75.0％、87.5％，ARDS發(fā)生率分別為37.5％、62.5％，24h All發(fā)生率均為100％，ARDS發(fā)生率分別為71.4％、87.5％，36h ALI發(fā)生率分別為85.7％、100％，ARDS發(fā)生率分別為14.3％、71.4％，差異均無顯著性(P>0.05)。③PaO2/FiO2:12、24、36h HC組分別為(31.72±12.06)kpa、(21.72±4.85)kpa、(31.33±8.26)kpa

8、，C組分別為(25.02±12.46)kpa、(19.25±8.07)kpa、(23.41±8.96)kpa，差異均無顯著性(P>0.05)。④Cdyn(ml/kg.kpa)：12、24、36hHC組分別為(4.22A=0.25)、(4.40-a=O.55)、(4.51~0.35)，C組分別為(3.88+1.18)、(4.44±0.80)、(4.99±0.76)，差異均無顯著性(P>0.05)。 2.2肺指數(shù)：HC組12h肺指數(shù)

9、為(0.333±0.082)％，明顯低于C組(0.480±0.146)％，(P<0.05)。 2.3病理損傷評分：①肺泡內(nèi)水腫：12h HC組(1.63±0.74)明顯低于C組(2.57±0.54)(P<0.05)。②肺泡內(nèi)炎細(xì)胞浸潤：12h HC組(2.25±0.46)明顯低于C組(2.86±0.38)，(P<0.05)。③肺透明膜形成、肺間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤評分各時(shí)間點(diǎn)HC、C組差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。④病理損傷總分：1

10、2h HC組(6.63±1.06)明顯低于C組(9.00±1.00)，(P<0.05)。 2.4 BALF總蛋白含量(mg/L)：HC組24、36h分別為(874.55±426.97)、(735.95±136.15)，C組分別為(1468.52±433.38)、(1350.95±410.55)，HC組均明顯低于C組(P<0.05)。 2.5 BALF中IL-8、IL-10、TNF-α濃度：①24h、36h HC組IL-8

11、濃度[(69.66±13.07)ng/L、(61.49±15.27)ng/L]~顯低于C組[(91.37±24.59)ng/L、(98.97±17.77)ne/L]，(P<0.05)；②12、24、36h HC組IL-10水平[(125.24±24.72)ng/L、(116.06±12.52)ng/L、(173.92±38.28)ng/L)]與C組[(127.98±28.03)ng/L、(118.33±25.62)ng/L、(136.4

12、6±34.00)ng/L]比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；③12、24、36h HC組TNF-α濃度-[(343.13±50.19)ng/L、(277.92±84.51)ng/L、(305.87±61.59)ne/L]均明顯低于C組[(467.51±76.09)ng/L、(360.12±34.69)ng/L、(375.26±25.79)ng/L]，(P<0.05)。 2.6血清中IL-8、IL-10、TNF-α濃度：①24h

13、、36h HC組IL-8水平[(164.18±22.20)ng/L、(163.72±48.69)ng/L]明顯低于C組[(213.35±46.32)ng/L、(238.86±73.68)ng/L]，(P<0.05)；②12、24、36h HC組IL-10水平[(179.28+69.73)ng/L、(126.384-34.99)ng/L、(134.76±56.02)ng/L)]與C組[(154.75±45.43)ng/L、(148.21±

14、38.57)ng/L、(172.46±51.77)ng/L]比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。③12、24、36h HC組TNF-α水平[(78.13+14.64)ng/L、(79.15±8.42)ng/L、(83.25±23.64)ng/L]均明顯低于C組[(120.39+22.53)ng/L、(107..0±34.18)ng/L、(140.94±33.82)ng/L]，(P<0.05)。 3.小劑量氫化可的松對模型大鼠生存

15、狀況影響：HC組生存率(68.8％)與C組(64.7％)差異無顯著性(Log RankP=0.775)。 結(jié)論： 1.本實(shí)驗(yàn)經(jīng)氣管滴入大腸桿菌(011184)，成功建立了肺內(nèi)源性ALI/ARDS動物模型。分時(shí)間點(diǎn)監(jiān)測了血液動力學(xué)、血?dú)?、肺功能指?biāo)和肺組織形態(tài)學(xué)改變，觀察了病情演變規(guī)律，為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)提供可靠的數(shù)據(jù)資料。 2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，單次小劑量氫化可的松治療大腸桿菌引起的大鼠肺內(nèi)源性ALI/ARDS，可短時(shí)間