重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)慢性阻塞性肺疾病肺血管重塑的影響.pdf

1、目的:研究慢性阻塞性肺疾病( chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠模型發(fā)病過程中,血管內(nèi)皮生長因子( Vascular endothelial growth factor,VEGF)表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化及其與肺血流動(dòng)力學(xué)相關(guān)指標(biāo)和肺血管重塑情況的關(guān)系,同時(shí)探討特異性內(nèi)源性血管生成抑制因子-重組人血管內(nèi)皮抑制素(Endostar)對(duì)慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺組織中VEGF表達(dá)的影響及其干

2、預(yù)后 COPD大鼠模型肺血流動(dòng)力學(xué)相關(guān)指標(biāo)和肺血管重塑情況的變化,從而了解VEGF在慢性阻塞性肺疾病發(fā)病過程中的作用及重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)慢性阻塞性肺疾病肺血管重塑的影響,為慢性阻塞性肺疾病的治療提供新的思路。
　　方法:實(shí)驗(yàn)分為兩部分。第一部分檢測(cè)慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型發(fā)病過程中,血管內(nèi)皮生長因子( Vascular endothelial growth factor,VEGF)表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化及其與肺血流動(dòng)力

3、學(xué)相關(guān)指標(biāo)和肺血管重塑情況的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)采用煙霧暴露疊加低氧復(fù)制COPD大鼠模型(共分四組,每組隨機(jī)分配雄性SD大鼠8只:正常對(duì)照組(A):第1、14天氣道內(nèi)注入生理鹽水,4周后檢測(cè);慢支組(B):第1、14天經(jīng)氣道內(nèi)注入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),200μg/次,4周后檢測(cè);COPD組(C):第1、14天氣道內(nèi)注入LPS,200μg/次,香煙煙霧暴露1h/天,共4周;COPD并低氧組(D):第1、14天氣道內(nèi)

4、注入LPS,200μg/次,香煙煙霧暴露1h/天,,共6周,實(shí)驗(yàn)的最后兩周同時(shí)給予疊加18％低氧8h/天)。
　　第二部分檢測(cè)特異性內(nèi)源性血管生成抑制因子-重組人血管內(nèi)皮抑制素(Endostar)對(duì)慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺組織中 VEGF mRNA和蛋白表達(dá)的影響及其干預(yù)后COPD大鼠模型肺血流動(dòng)力學(xué)相關(guān)指標(biāo)和肺血管重塑情況的變化。(共分四組,每組隨機(jī)分配雄性SD大鼠8只:Endostar干預(yù)組為:A1(空白對(duì)照組)、B1(慢支

5、干預(yù)組)、C1(COPD干預(yù)組)、D1(COPD并低氧干預(yù)組)。動(dòng)物模型制作同各對(duì)應(yīng)組,從第3周起給各藥物干預(yù)組腹腔內(nèi)注射Endostar,劑量7.5mg.m2-1.d-1(1.25mg.Kg-1)。A1組從第3周起腹腔內(nèi)注射同Endostar劑量相同的生理鹽水。
　　各組動(dòng)物模型造模完成后均檢測(cè)以下指標(biāo):測(cè)定各組大鼠氣道阻力及肺血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo):右心室收縮壓( right ventricular systolic pressure

6、,RVSP)、肺動(dòng)脈平均壓(mean pulmonary arterial pressure, mPAP)、右心室肥厚指數(shù)(the right ventricular hypertrophy index, RV/LV+S)。HE染色觀察肺組織病理改變,VG+維多利亞藍(lán)特殊染色檢測(cè)肺血管重塑指標(biāo):肺小動(dòng)脈血管壁厚度與血管外徑比(WT%)、血管壁面積與血管總面積比(WA%)。免疫組化法檢測(cè)各組肺組織中VEGF的表達(dá), ELISA、RT-PC

7、R分別檢測(cè)各組肺泡灌洗液(BALF)及血清VEGF的表達(dá)情況及肺組織勻漿中VEGF mRNA表達(dá)情況。Western blot檢測(cè)肺組織VEGF蛋白表達(dá)情況。分析VEGF的表達(dá)情況與肺血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)及肺血管重塑指標(biāo)的相關(guān)性。
　　結(jié)果:1.氣道阻力及肺血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)(mPAP、RVSP、RVHI):與A組相比,B組氣道阻力及各項(xiàng)肺血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)均較 A組無明顯差異(P﹥0.05);而C、D組上述指標(biāo)均較A組明顯增高(P<0.05)

8、。使用重組人血管內(nèi)皮抑制素(Endostar)干預(yù)后, B1組氣道阻力及各項(xiàng)肺血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)較對(duì)應(yīng)的B組無明顯差異(P﹥0.05),而 C1、D1組上述指標(biāo)均對(duì)應(yīng)的 C、D組明顯下降(P<0.05)。以生理鹽水做空白對(duì)照的A1組上述指標(biāo)較對(duì)應(yīng)的A組無明顯差異(P﹥0.05)。
　　2.肺血管重塑指標(biāo)(WT%、WA%):與A組相比,B組肺血管重塑指標(biāo)均較 A組無明顯差異(P﹥0.05);而 C、D組上述指標(biāo)均較 A組明顯增高(P<0

9、.05)。使用重組人血管內(nèi)皮抑制素(Endostar)干預(yù)后, B1組肺血管重塑指標(biāo)較對(duì)應(yīng)的B組無明顯差異(P﹥0.05),而 C1、D1組上述指標(biāo)均對(duì)應(yīng)的C、D組明顯下降(P<0.05)。以生理鹽水做空白對(duì)照的 A1組上述指標(biāo)較對(duì)應(yīng)的A組無明顯差異(P﹥0.05)。
　　3.血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)情況:與A組相比,B組VEGF mRNA及蛋白表達(dá)較A組升高(P<0.05),而此組VEGF在BALF及血清中的濃度及VE

10、GF在肺血管的表達(dá)量較A組無明顯差異(P﹥0.05)。C、D組VEGF的表達(dá),包括其mRNA、蛋白、其在BALF中的濃度及在肺血管的表達(dá)量均較A組明顯增高(P<0.05);但C組VEGF在血清中濃度較A組無明顯差異(P﹥0.05)。使用重組人血管內(nèi)皮抑制素(Endostar)干預(yù)后, B1組VEGF mRNA及其在血清中的濃度較對(duì)應(yīng)的B組下降(P<0.05),而VEGF蛋白表達(dá)、其在BALF中的濃度及在肺血管的表達(dá)量均較對(duì)應(yīng)的B組無明顯

11、差異(P﹥0.05)。C1、D1組上述各項(xiàng)指標(biāo)均對(duì)應(yīng)的C、D組明顯下降(P<0.05)。以生理鹽水做空白對(duì)照的A1組上述指標(biāo)較對(duì)應(yīng)的A組無明顯差異(P﹥0.05)。
　　4.VEGF的表達(dá)情況與肺血流動(dòng)力學(xué)、肺血管重塑指標(biāo)的相關(guān)性分析:VEGF的表達(dá)量與肺血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)(mPAP、RVSP)及肺血管重塑指標(biāo)(WT%、WA%)成正相關(guān);使用重組人血管內(nèi)皮抑制素干預(yù)后,VEGF的表達(dá)量下降,肺血流動(dòng)力學(xué)、肺血管重塑指標(biāo)均相應(yīng)好轉(zhuǎn)。

12、r>　　結(jié)論:①在COPD發(fā)展的各個(gè)階段中,早期已經(jīng)出現(xiàn)肺血管重塑,隨著病情進(jìn)展,肺血管重塑逐漸加重,并出現(xiàn)明顯肺血流動(dòng)力學(xué)異常。肺血管重塑的程度與COPD病情嚴(yán)重情況密切相關(guān)。②VEGF參與了COPD病情發(fā)展的全過程,并隨著COPD病情的加重,VEGF表達(dá)逐漸增高。其可能通過影響肺血管重塑促進(jìn)COPD病程進(jìn)展。③重組人血管內(nèi)皮抑制素可以通過抑制內(nèi)源性VEGF的生成、下調(diào)VEGF的表達(dá),起到改善肺血管重塑程度,減輕肺血流動(dòng)力學(xué)的異常,減