家蠶無(wú)鱗片翅突變體scaleless產(chǎn)生機(jī)理的研究.pdf

1、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文家蠶無(wú)鱗片翅突變體scaleless產(chǎn)生機(jī)理的研究姓名：周慶祥申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師：張志芳20070601個(gè)原神經(jīng)基因中BInASHl是最早分化形成的一個(gè)；BmA跚2利BmASH3同源性最高，推測(cè)相對(duì)于BmASHl形成較晚。用RTPCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)了家蠶ASH基因在幼蟲期不同組織器官及胚胎發(fā)育過程中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)BmASHl和BInASH2表達(dá)范圍最』“，胚胎發(fā)育過程中

2、也有較高的表達(dá)量；而BmASH3表達(dá)特異性相對(duì)較高，因此推斷其形成較BmASH2為晚，即Bm_ASH3是四個(gè)家蠶ASH基因中最晚形成的一個(gè)。ase基因主要在神經(jīng)前體細(xì)胞中表達(dá)，岡此Bmase表達(dá)范圍較窄，組織中總體表達(dá)量較低。但同源比較和功能分析都不能將家蠶的三個(gè)原神經(jīng)基因和果蠅的一一對(duì)應(yīng)，囚此其命名依然按照發(fā)現(xiàn)的先后順序進(jìn)行。通過半定量RTPCR發(fā)現(xiàn)家蠶的吐絲期利蛹期，BmMSHl和Bm以SH3基因在scaleless和、帆1家蠶中的

3、表達(dá)時(shí)相幾乎一致：BmASH2只在0d～2d的wT蛹翅中表達(dá)，而scaleless中沒有檢測(cè)到表達(dá)信號(hào)。原位雜交結(jié)果也證明BInASH2在scaleless蛹翅中不能正常表達(dá)。將wT及scaleless的BmASH2基因起始密碼子上游的啟動(dòng)子序列克隆并測(cè)序，發(fā)現(xiàn)scaleless的ATG上游1027bp處有一段連續(xù)26bp的缺失突變。利用家蠶細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)分析了BmASH2基閌啟動(dòng)子活性，發(fā)現(xiàn)scaleless比wT低得多，只與截去了

4、其缺失的26bp的979bpwT啟動(dòng)子片段的活性相當(dāng)。EMSA結(jié)果顯示scaleless缺失的26bp序列可以特異性結(jié)合某種核蛋白。遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)則證明26bp序列缺失與無(wú)鱗片翅突變表型緊密連鎖。這些都說明scaleless的BmASH2基因因啟動(dòng)子突變而使其不能正常轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。利用瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)使BInASH2基岡在scaleless早期蛹翅中表達(dá)，可以使翅面鱗片明顯增多，進(jìn)一步說明BmASH2是家蠶翅面鱗片產(chǎn)生的芙鍵因子。從而初步闡明了家