福建引種的主要相思樹(shù)種遺傳分析及其雜交試驗(yàn)的初步研究.pdf

1、本論文對(duì)福建引種的20種相思樹(shù)種(ACaCia spp．)進(jìn)行RAPD遺傳分析并對(duì)其中的19種相思樹(shù)種進(jìn)行ISSR遺傳分析，并通過(guò)掃描電子顯微鏡觀(guān)察其中的10種相思樹(shù)種的花粉亞顯微結(jié)構(gòu)，在以上結(jié)論的基礎(chǔ)上，進(jìn)行相思樹(shù)種間的雜交育種試驗(yàn)以及利用ISSR技術(shù)對(duì)其中一個(gè)雜交組合的1代子代進(jìn)行親緣間的分子鑒定，研究結(jié)果如下： 1．建立了相思樹(shù)種RAPD分析的技術(shù)體系：20ul的反應(yīng)體系中，含13.72 ul ddH<,2>O、2.0mm

2、ol/LBuffer(含Mg<'2+>)、 1.2mmol/LdNTP、 0.28mmol/LTaq、 1/2mmol/LPrimer、1.6 ulDNA模板的量。反應(yīng)程序?yàn)?4℃預(yù)熱2min，然后執(zhí)行38個(gè)擴(kuò)增循環(huán)，每個(gè)循環(huán)中，94℃變性30sec，38℃復(fù)性1min，72℃延伸90sec，72℃延伸7min。 2．從100個(gè)RAPD隨機(jī)引物中篩選出穩(wěn)定產(chǎn)物，擴(kuò)增帶清晰，特異性強(qiáng)的14個(gè)有效引物。14個(gè)有效引物在20種相思樹(shù)種

3、中共擴(kuò)增193條DNA譜帶，多態(tài)性條帶百分比平均為96.89％。 3．對(duì)RAPD數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類(lèi)可知，流蘇相思和珍珠葉相思最先聚在一起，其次是露珠荊相思和粉莢荊相思，它們的相異系數(shù)分別為0.15，0.22，對(duì)應(yīng)的遺傳距離也是0.15，0.22，馬雜4相思最后聚合，處在聚類(lèi)圖的外圍：，當(dāng)取值水平在D=0.43上，其結(jié)合線(xiàn)將20種相思樹(shù)種劃分為1個(gè)大類(lèi)群、1個(gè)小類(lèi)、2個(gè)獨(dú)立的個(gè)類(lèi)，即：第一大類(lèi)為紋莢相思、流蘇相思、珍珠葉相思、黑木相思、

4、灰木相思、直桿大葉相思、薄莢相思、臺(tái)灣相思、厚莢相思、馬占相思、馬雜1相思、象耳相思、多花相思；第二類(lèi)包括露珠荊相思、粉莢荊相思、銀荊相思、夾竹桃葉相思、榕葉荊相思；第三類(lèi)有卷莢相思；第四類(lèi)僅有馬雜4相思。 4．建立了相思樹(shù)種ISSR分析的技術(shù)體系：10ul的反應(yīng)體系中，含7,15 ulddH<,2>O、0.75mmol/LBuffer(含Mg<'2+>)、 0.1mmol/LdNTP、 0.1mnlol/LTaq、0.9mmo

5、l/LPrimer、1.0u1DNA模板的量。反應(yīng)程序?yàn)?4℃預(yù)熱2min，然后執(zhí)行35個(gè)擴(kuò)增循環(huán)，每個(gè)循環(huán)中，94℃變性60sec，復(fù)性(溫度根據(jù)引物不同來(lái)確定)lmin，72℃延伸120sec，72℃延伸7min。 5．在19種相思樹(shù)種中，從50條ISSR引物中篩選出9條能擴(kuò)增出清晰帶型并具多態(tài)性的引物，共擴(kuò)增出93個(gè)DNA片段，其中91個(gè)片段呈現(xiàn)多態(tài)性，占總擴(kuò)增片段的97.8％。 6．從ISSR聚類(lèi)圖上可以看出，露

6、珠荊相思和粉莢荊相思最先聚在一起，相異系數(shù)為0.20，對(duì)應(yīng)的遺傳距離也是0.20，然后它們與銀荊相思再聚在一起；其次是馬占相思和馬雜1相思聚在一起，相異系數(shù)為0.27，對(duì)應(yīng)的遺傳距離也是0.27；卷莢相思最后聚合，處在聚類(lèi)圖的外圍，當(dāng)取值水平在D=0.50上，其結(jié)合線(xiàn)將19種相思樹(shù)種劃分為2個(gè)大類(lèi)群、2個(gè)獨(dú)立的個(gè)類(lèi)，即：第一大類(lèi)為流蘇相思、珍珠葉相思、直桿大葉相思、露珠荊相思、粉莢荊相思、銀荊相思、夾竹桃葉相思、榕葉荊相思；第二大類(lèi)包括

7、多花相思、黑木相思、灰木相思、薄莢相思、臺(tái)灣相思、厚莢相思、馬占相思、馬雜1相思、象耳相思；第三類(lèi)有卷莢相思；第四類(lèi)僅有紋莢相思。ISSR分析所獲得的分類(lèi)結(jié)果與RAPD所獲得結(jié)果相近，但并不完全相同。 7．利用掃描電子顯微鏡對(duì)10種相思樹(shù)種的花粉形態(tài)進(jìn)行了觀(guān)察和比較研究，結(jié)果表明，研究的10種相思花粉形態(tài)高度一致，均為16合體，花粉排列由中央8粒花粉排上下兩層，每層各為4粒，周緣為單層的8粒花粉，界限清楚，16合體呈扁球形，側(cè)面

8、觀(guān)為橢圓形。單?；ǚ蹫殚L(zhǎng)方形或近長(zhǎng)方形，相思樹(shù)種的花粉可能為無(wú)孔溝類(lèi)。 8．通過(guò)套袋授粉對(duì)相思樹(shù)種進(jìn)行雜交育種試驗(yàn)，獲得7個(gè)雜交組合有莢果，其中在馬雜4相思×厚莢相思組合中，獲得一棵雜交種苗種于溫室：在紋莢相思×直桿大葉相思組合中，獲得莢果還在成熟中，其余雜交組合也都獲得莢果和一些成熟的種子，表明相思樹(shù)種種間雜交是可行的。 9．對(duì)紋莢相思×直桿大葉相思組合的父母本及子代莢果利用ISSR技術(shù)進(jìn)行分子鑒定，可初步鑒定此雜交的