EZH2蛋白在他莫昔芬耐藥乳腺癌MCF-7細(xì)胞系的表達(dá)及對其細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　通過檢測EZH2蛋白在他莫昔芬耐藥乳腺癌MCF-7細(xì)胞(MCF-7/Tam+細(xì)胞)及他莫昔芬敏感乳腺癌MCF-7細(xì)胞（MCF-7/Tam-細(xì)胞）的表達(dá)情況，并探討EZH2對兩種乳腺癌細(xì)胞株增殖的影響。
　　方法：
　　1.通過Western blot法在MCF-7/Tam+細(xì)胞和MCF-7/Tam-細(xì)胞中檢測EZH2蛋白表達(dá)差異。
　　2.采用10 nmol/l的雌二醇和10 nmol/l4-羥他莫昔

2、芬(4-OHT)分別處理MCF-7/Tam-細(xì)胞24 h后檢測EZH2蛋白的變化。
　　3.使用LipofectamineTM2000將靶向抑制EZH2的siRNA（siRNA-EZH2）轉(zhuǎn)染至MCF-7/Tam+細(xì)胞，運(yùn)用實(shí)時(shí) PCR檢測EZH2基因的相對表達(dá)量，Western blot法檢測EZH2蛋白表達(dá)量以驗(yàn)證siRNA的有效性。
　　4.將siRNA-EZH2轉(zhuǎn)染至MCF-7/Tam+和MCF-7/Tam-細(xì)胞，采

3、用細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測細(xì)胞數(shù)，MTT檢測細(xì)胞增殖情況（570 nm波長處吸光度值）。
　　結(jié)果：
　　1. EZH2蛋白在 MCF-7/Tam+細(xì)胞中相對表達(dá)量為2.237±0.091，高于在MCF-7/Tam-細(xì)胞中的相對表達(dá)量（1.870±0.114）（t=8.582，P=0.013）。
　　2.與陰性對照組（EZH2相對表達(dá)量：0.480±0.017）相比，經(jīng)10 nmol/l的雌二醇誘導(dǎo)MCF-7/Tam-細(xì)胞24 h

4、后EZH2蛋白相對表達(dá)量為0.657±0.015，相同濃度的4-羥基他莫昔芬處理 MCF-7/Tam-細(xì)胞24 h后 EZH2蛋白相對表達(dá)量為0.423±0.012（F=175.032，P=0.000）。
　　3.轉(zhuǎn)染 siRNA-EZH2至 MCF-7/Tam+細(xì)胞后，EZH2 mRNA相對表達(dá)量下降了69％（t=14.061，P=0.005），EZH2蛋白的相對表達(dá)量降低了42%（t=15.366，P=0.004），差異有統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)意義。
　　4.細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示與對照組相比，轉(zhuǎn)染siRNA-EZH2的MCF-7/Tam-細(xì)胞組細(xì)胞數(shù)在第3，4，5天明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=77.515，P=0.001）；轉(zhuǎn)染siRNA-EZH2的MCF-7/Tam+細(xì)胞組與對照組相比，細(xì)胞數(shù)在第3，4，5天明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=702.347，P=0.000）。
　　5. MTT結(jié)果顯示與對照組相比，轉(zhuǎn)染siRNA-EZH2的MCF-7/Tam-細(xì)

6、胞組及轉(zhuǎn)染siRNA-EZH2的MCF-7/Tam+細(xì)胞組在570 nm波長處的吸光度值分別降低了43%（t=9.676，P=0.011）、77%（t=65.069，P=0.000）,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　相較于他莫昔芬敏感乳腺癌MCF-7細(xì)胞（MCF-7/Tam-細(xì)胞），EZH2在他莫昔芬耐藥乳腺癌MCF-7細(xì)胞（MCF-7/Tam+）細(xì)胞中高表達(dá)。為確認(rèn)siRNA的有效性，將靶向EZH2的siRNA（siR