基質(zhì)金屬蛋白酶3-MMP3在抗登革病毒感染中的作用及機(jī)制的研究.pdf

1、登革病毒是當(dāng)今世界上分布最廣的一種蟲(chóng)媒傳染病毒,主要由叮咬人的埃及伊蚊和白紋伊蚊傳播。據(jù)WHO估計(jì),全球每年新增數(shù)百萬(wàn)的登革病毒感染者,因登革病毒感染導(dǎo)致死亡的人數(shù)約2.5萬(wàn)。目前,登革病毒感染的機(jī)制仍不明確,由于各血清型之間缺乏有效的交叉保護(hù),又存在抗體依賴的增強(qiáng)作用等,至今仍無(wú)安全有效的疫苗可用。因此,研究宿主抗登革病毒的分子機(jī)制,對(duì)于了解登革熱的發(fā)病過(guò)程具有重要意義。
　　本文從JAK-STAT信號(hào)通路入手,來(lái)研究宿主細(xì)胞抗

2、登革病毒感染的分子機(jī)制,著重關(guān)注包括基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)在內(nèi)的幾個(gè)JAK-STAT下游效應(yīng)分子在抗登革病毒感染中的具體作用。我們研究在登革病毒感染巨噬細(xì)胞前后,84個(gè)JAK-STAT相關(guān)基因的表達(dá)變化。結(jié)果顯示基質(zhì)金屬蛋白酶MMP3表達(dá)上調(diào)了3.68倍。為了進(jìn)一步驗(yàn)證PCR芯片的結(jié)果,我們又用定量PCR的方法在多種細(xì)胞中證明了MMP3在登革病毒感染的細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)。抑制MMP3的表達(dá),病毒的感染水平顯著上升;而在RAW264.7

3、細(xì)胞中過(guò)表達(dá)MMP3又可以抑制登革病毒的復(fù)制,這就揭示MMP3具有抗登革病毒感染的作用。為了了解MMP3抗病毒的分子機(jī)制,我們分別檢測(cè)了MMP3沉默的細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞經(jīng)登革病毒感染后,代表性抗病毒相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),MMP3沉默的細(xì)胞中,抗病毒相關(guān)細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)水平顯著降低。免疫熒光發(fā)現(xiàn)MMP3在登革病毒感染的細(xì)胞中會(huì)發(fā)生從細(xì)胞質(zhì)到細(xì)胞核的遷移;而且雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果顯示,在病毒感染的細(xì)胞中,沉默掉MMP3,N

4、FκB的轉(zhuǎn)錄活性下調(diào),過(guò)表達(dá)MMP3又可以很強(qiáng)地激活NFκB。鑒于以上這些結(jié)果,我們推測(cè)MMP3很有可能是通過(guò)進(jìn)入細(xì)胞核來(lái)影響NFκB的轉(zhuǎn)錄活性從而達(dá)到抗病毒作用。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中通過(guò)采用熒光定位和免疫共沉淀的方法得到了MMP3與NFκB在登革病毒感染的細(xì)胞中存在相互作用的結(jié)果。MMP3由信號(hào)域,前肽域,催化域,鉸鏈區(qū)和羧基末端域等5個(gè)結(jié)構(gòu)域組成,為了檢測(cè)與NFκB相互作用的結(jié)構(gòu)域,我們構(gòu)建了含MMP3各個(gè)結(jié)構(gòu)域的質(zhì)粒,并分別與NFκB的兩