染料木素誘導(dǎo)BGC-823細(xì)胞凋亡機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:以人胃癌細(xì)胞BGC-823作為研究對(duì)象，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證了明染料木素(Genistein，Gen)對(duì)人胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的抑制和誘導(dǎo)其細(xì)胞凋亡的作用，并通過(guò)研究Gen在誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞凋亡過(guò)程中凋亡相關(guān)因子Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3等蛋白的表達(dá)變化，分析其可能的作用通路，旨在探討染料木素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。
　　 方法:(1)對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，Gen濃度取10、20、40、80、

2、160μmol/L6個(gè)藥物濃度處理組，選取24h、48h、72h三個(gè)作用時(shí)間進(jìn)行檢測(cè)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)改變，采用MTT實(shí)驗(yàn)測(cè)定Gen對(duì)細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制情況。(2) Hoechst熒光染色觀察細(xì)胞核的變化，流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞周期分布和亞二倍體峰。(3) Western Blotting檢測(cè)Gen對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞株中Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3蛋白表達(dá)的影響。(4)80μmol/L的Ge

3、n結(jié)合不同濃度的Caspase-3特異性抑制劑Z-DEVD-FMK(0，5，10，20，40μmol/L)，檢測(cè)Caspase-3蛋白活性對(duì)Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。(5)20μmol/L，的Z-DEVD-FMK聯(lián)合不同濃度的Bcl-2抑制劑HA14-1(0，5，10，20，40μmol/L)，檢測(cè)Bcl-2蛋白活性對(duì)細(xì)胞株中Caspase-9活性的影響。
　　 結(jié)果:(1) Gen作用于BGC-823細(xì)胞株后，細(xì)胞出現(xiàn)生長(zhǎng)抑制

4、現(xiàn)象。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Gen對(duì)細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制作用具有濃度—時(shí)間依賴性。24h、48h、72h的半數(shù)生長(zhǎng)濃度(IC50)分別為247.3、84.2、65.3μmol/L。與對(duì)照組相比，160μmol/L的Gen對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率24h、48h、72h分別為32.9±2.61％((p＜0.05)、64.1±3.12％(p＜0.01)、86.2±2.94(p＜0.01)。(2)處理組細(xì)胞株出現(xiàn)染色質(zhì)聚縮、細(xì)胞核碎裂、細(xì)胞核物質(zhì)邊緣化，呈現(xiàn)典

5、型的凋亡特征。(3) FCM結(jié)果顯示，Gen作用后的細(xì)胞株G0/G1期細(xì)胞無(wú)明顯改變，S期細(xì)胞增加，G2期細(xì)胞減少，且不同藥物濃度作用下的凋亡峰值不同。(4) Gen作用后，細(xì)胞株中Bcl-2、Caspase-9和Caspase-3蛋白則隨著藥物濃度的增大表達(dá)量升高。(5)當(dāng)不同濃度的Caspase-3抑制劑Z-DEVD-FMK與Gen共同作用于BGC-823細(xì)胞株后，Bcl-2蛋白隨著Z-DEVD-FMK作用濃度的增加而表達(dá)量升高。(

6、6) Z-DEVD-FMK與不同濃度的Bcl-2抑制劑HA14-1作用時(shí)，隨著HA14-1作用濃度的增大，Caspase-9蛋白酶活性增大。
　　 結(jié)論:(1) Gen對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823有生長(zhǎng)抑制作用。(2)Gen對(duì)細(xì)胞株中Bcl-2蛋白的表達(dá)有抑制作用，對(duì)Caspase-9、Caspase-3蛋白表達(dá)有促進(jìn)作用。(3) Caspase-3蛋白的活性與Bcl-2蛋白的表達(dá)有負(fù)相關(guān)性。(4) Bcl-2蛋白的表達(dá)活性與Ca