人結(jié)腸癌耐藥細胞株HT-29-5-Fu的構(gòu)建及基因表達譜變化.pdf

1、目的：采用人結(jié)腸癌HT-29為親本細胞株，持續(xù)藥物濃度遞增法構(gòu)建人結(jié)腸癌耐藥細胞株，細胞學觀察腫瘤細胞生物學特性變化，全人類基因組表達譜芯片分析比較兩株細胞基因表達譜差異，初步探索結(jié)腸癌細胞中可能與5-Fu耐藥相關(guān)的基因，為今后進一步研究耐藥機制、篩選耐藥分子標記物奠定基礎(chǔ)。
　　方法：⑴采用5-Fu持續(xù)接觸濃度梯度遞增法構(gòu)建人結(jié)腸癌耐藥細胞株HT-29/5-Fu；⑵觀察耐藥細胞株HT-29/5-Fu的生物學特性：觀察細胞形態(tài)變化

2、和克隆形成率；MTT法測定生長曲線和藥物敏感性；Western blot分析胸苷酸合成酶（TS）、二氫嘧啶脫氫酶（DPD）的表達情況；流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡；⑶利用全人類基因組表達譜芯片檢測耐藥細胞株HT-29/5-Fu及其親本HT-29細胞差異表達的基因，并運用生物信息學的方法篩選出可能與5-Fu耐藥相關(guān)的基因及通路。
　　結(jié)果：①歷時10個月成功建立了能在1μg/mL5-Fu濃度下穩(wěn)定生長的耐藥細胞株HT-29/5-Fu

3、；②HT-29/5-Fu耐藥細胞的生物學特性發(fā)生改變，其耐藥指數(shù)為3.59；與HT-29細胞相比，HT-29/5-Fu細胞形態(tài)發(fā)生改變，生長緩慢，克隆形成率降低，TS和DPD高表達，S期細胞比例增多，更能耐受5-Fu誘導的細胞凋亡；③基因芯片結(jié)果顯示：HT-29/5-Fu耐藥細胞與其親本HT-29細胞相比，共有211個差異表達的基因（變化倍數(shù)≥2或≤0.5），其中有115個基因表達上調(diào)（變化倍數(shù)≥2），96個基因下調(diào)（變化倍數(shù)≤0.5）

4、。這些表達失調(diào)的基因中有17個基因已被報道過與各種化療藥物耐藥相關(guān)，其中與5-Fu耐藥密切相關(guān)的基因包括編碼5-Fu作用靶酶的TYMS、ABCG2、YES1和MDK。另外，某些差異表達的基因還與多藥耐藥（M DR）、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EM T）、腫瘤細胞的增殖、侵襲、抗凋亡和細胞周期捕獲等相關(guān)。GO（基因功能）分析結(jié)果顯示上述差異表達基因在跨膜轉(zhuǎn)運活性、信號轉(zhuǎn)導活性、DN A結(jié)合以及轉(zhuǎn)錄因子活性等分子功能方面得到了富集。KEGG通路分析顯示