維生素C及其與抗腫瘤藥物AS2O3、DDP聯(lián)合對肺癌A549細胞的抑制與協(xié)同作用.pdf

1、目的: 探討維生素C對肺癌A549細胞增殖、凋亡的影響及其聯(lián)合三氧化二砷(AS2O3)、順鉑(DDP)對肺癌A549細胞增殖、凋亡的協(xié)同作用,進一步探討維生素C對A549細胞增殖、凋亡影響的可能機制。
　　方法: 在體外培養(yǎng)的肺癌A549細胞株,加入不同濃度的維生素C、DDP、AS2O3、順鉑+維生素C、AS2O3+維生素C,采用細胞生長曲線及克隆形成實驗檢測細胞生長情況;以400 ug/ml濃度的維生素C作用于肺癌A549細胞,

2、在其分別作用6h、12h、24h、48h后行流式細胞檢測細胞周期及凋亡率并提取總RNA及蛋白,RT-PCR檢測SurvivinmRNA、Caspase-3mRNA、MDR1、MRP1mRNA的表達,Western blot檢測Survivin蛋白、Caspase-3蛋白的表達。
　　結果: 1.生長曲線:分別以40ug/ml、400ug/ml、4mg/ml的維生素C(分別是1/10臨床用藥量、1倍臨床用藥量、10倍臨床用藥量)作用

3、于肺癌A549細胞,繪制生長曲線,發(fā)現(xiàn)40ug/ml維生素C對A549增殖的影響不明顯,而400ug/ml維生素C對A549細胞明顯抑制其增殖。以臨床治療用藥量即400ug/ml的維生素C分別聯(lián)合0.4 ug/ml、4 ug/ml、40ug/ml(分別是1/10臨床用藥量、1倍臨床用藥量、10倍臨床用藥量)的DDP作用于A549細胞,繪制生長曲線發(fā)現(xiàn)400ug/ml的維生素C聯(lián)合0.4 ug/ml的DDP時即已明顯抑制其增殖,其抑瘤率與

4、單用0.4 ug/ml的DDP、400ug/ml的維生素C有顯著差異;與單用4 ug/ml、40ug/ml的DDP時無明顯差異。400ug/ml的維生素C分別聯(lián)合0.04ug/ml、0.4 ug/ml、4 ug/ml、40ug/ml(分別是1/100臨床用藥量、1/10臨床用藥量、1倍臨床用藥量、10倍臨床用藥量)的AS2O3作用于A549細胞,繪制生長曲線發(fā)現(xiàn)400ug/ml的維生素C聯(lián)合0.04ug/ml的AS2O3時即已明顯抑制其

5、增殖,抑瘤率與單用0.04 ug/ml的AS2O3、400ug/ml的維生素C有顯著差異;與單用4 ug/ml的AS2O3無明顯差別。
　　2.克隆形成實驗:400ug/ml維生素C作用下的A549細胞克隆數(shù)明顯減少,成瘤率明顯降低。400ug/ml的維生素C聯(lián)合0.4 ug/ml的DDP時抑瘤率與單用0.4 ug/ml的DDP、400ug/ml的維生素C有顯著差異。400ug/ml的維生素C聯(lián)合0.04ug/ml的AS2O3時抑

6、瘤率與單用0.04 ug/ml的AS2O3、400ug/ml的維生素C有顯著差異。
　　3.流式細胞術檢測:以400ug/ml維生素C作用于A549細胞分別作用6h、12h、24h、48h后使A549細胞阻滯在G0/G1、S期,并且隨著作用時間的延長細胞凋亡率逐漸增加。流式細胞術檢測結果表明DDP組及DDP聯(lián)用維生素C組把A549細胞阻滯在G0/G1期,明顯延長A549的細胞周期,DDP聯(lián)用維生素C組明顯協(xié)同增加細胞的凋亡。AS2

7、O3組及AS2O3聯(lián)用維生素C組把A549細胞阻滯在G0/G1期,明顯延長A549的細胞周期,并且AS2O3聯(lián)用維生素C組明顯協(xié)同增加細胞的凋亡。
　　4.RT-PCR檢測:維生素C可以上調Caspase-3mRNA的表達;對SurvivinmRNA的表達未見明顯影響;維生素C并未明顯影響MRP1mRNA的表達,但在不影響AS2O3誘導細胞凋亡的基礎上上調了MDR1mRNA的表達。
　　5. Western blot檢測:維