寵物彎曲菌和沙門菌流行病學(xué)及其分離株分子特征分析.pdf

1、彎曲菌（Campylobacter）和沙門菌(Salmonella)是全球范圍內(nèi)重要的人獸共患病原菌，廣泛存在于人類、寵物、畜禽和各種食品原料等，對人類健康造成巨大危害。而與寵物的親密接觸被認(rèn)為是人類感染彎曲菌和沙門菌的重要來源。因此，加強對寵物群體彎曲菌和沙門菌的監(jiān)測和預(yù)防，明晰不同源菌株間的傳播途徑，對于人彎曲菌病和沙門菌病的防控有重要意義。本研究的主要目的為:(1)調(diào)查揚州市寵物以及人源、禽源的彎曲菌和沙門菌的分布狀況和流行特點，

2、并追蹤調(diào)查部分寵物家庭，探究寵物家庭中彎曲菌和沙門菌在人和寵物間的流行。(2)對不同來源分離株進行MLST分型研究，分析寵物與其它來源彎曲菌和沙門菌的分布特征，明晰不同宿主間的傳播規(guī)律，并結(jié)合PubMLST數(shù)據(jù)庫中國際菌株的資料，比較國內(nèi)外彎曲菌主要流行的克隆群。
　　一、揚州市寵物及其它來源彎曲菌和沙門菌的流行病學(xué)調(diào)查
　　自2015年7月至2016年9月期間，于揚州某動物醫(yī)院隨機采集就診寵物直腸棉拭子607份，采集病禽的

3、肝、腸樣品97份;于揚州市A醫(yī)院收集腹瀉人群送檢糞便樣品204份;于活禽市場和3個主要的農(nóng)貿(mào)市場等采集活禽泄殖腔棉拭子樣品、肉雞胴體表面擦拭樣品和環(huán)境樣品共354份;追蹤25戶寵物家庭，采集寵物、人及環(huán)境樣品共333份。參照國標(biāo)方法，對上述1595份樣品進行空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌，以及沙門菌的檢測和分離鑒定。彎曲菌檢測結(jié)果顯示，動物醫(yī)院采集的寵物樣品中分離到25株空腸彎曲菌和8株結(jié)腸彎曲菌，陽性率分別為4.1％和1.3％;分類統(tǒng)計結(jié)果顯

4、示，本研究中臨床表現(xiàn)腹瀉癥狀的寵物彎曲菌陽性率顯著高于無腹瀉癥狀的寵物(P＜0.05);幼年寵物（1歲以下）彎曲菌檢出率顯著高于成年寵物(P＜0.05);而不同性別的寵物間的彎曲菌檢出率無明顯差異(P＞0.05)。醫(yī)院腹瀉人群樣品中分離到空腸彎曲菌11株，陽性率為5.4％;結(jié)腸彎曲菌5株，陽性率為2.5％。禽源樣品中，采集于動物醫(yī)院畜禽門診的病禽內(nèi)臟樣品中共分離到16株空腸彎曲菌和29株結(jié)腸彎曲菌，陽性率分別為16.5％和29.9％，其

5、中10份樣品為空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌混合感染，混合感染的比例為10.3％;采集于活禽市場的活禽肛拭樣品中共分離到23株空腸彎曲菌和13株結(jié)腸彎曲菌，陽性率分別為15.6％和8.8％，未發(fā)現(xiàn)混合感染現(xiàn)象;采集于農(nóng)貿(mào)市場的肉雞胴體表面擦拭樣品中共分離到37株空腸彎曲菌和48份結(jié)腸彎曲菌，陽性率分別為34.6％和44.8％，其中21份樣品為空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌混合感染，混合感染比例為19.6％。沙門菌檢測結(jié)果顯示，動物醫(yī)院寵物樣品中共分離到

6、15株沙門菌，陽性率為2.5％;其中503份犬肛拭樣中，13株為沙門菌陽性，陽性率為2.6％;104份貓肛拭樣中，分離到2株沙門菌，陽性率為1.9％。醫(yī)院腹瀉人群樣品中共分離到11株沙門菌，陽性率為5.4％;分類統(tǒng)計結(jié)果顯示女性的沙門菌陽性率高于男性，但差異不顯著（P＞0.05）;年齡為14歲以下人群彎曲菌平均陽性率顯著高于14歲以上人群(P＜0.05)。采集于畜禽門診、活禽市場及農(nóng)貿(mào)市場中共計451份禽源樣品中共檢出31份沙門菌陽性，

7、平均陽性率為6.9％。沙門菌血清型鑒定結(jié)果顯示，寵物源沙門菌分離株所包含血清型種類最多，且分布較為分散，包括鼠傷寒、腸炎、德爾卑、倫敦沙門菌等國內(nèi)常見的血清型，以及菲爾摩雷、因切帕克、達布沙門菌等國內(nèi)罕見的血清型，不同來源分離株中優(yōu)勢血清型有所不同，但部分血清型呈交叉分布。
　　25戶寵物家庭中彎曲菌和沙門菌流行追蹤調(diào)查，共檢出彎曲菌陽性和沙門菌陽性的家庭各3戶。其中一戶寵物犬檢出為結(jié)腸彎曲菌陽性的家庭中，同時在該犬經(jīng)?；顒拥牟莸?/p>

8、所采集的土壤樣品中也檢出結(jié)腸彎曲菌陽性。此外，1位臨床表現(xiàn)健康的寵物飼養(yǎng)者被檢出為空腸彎曲菌和鼠傷寒沙門菌混合感染。本研究所采集的共計1595份不同來源樣品中，共有5份樣品出現(xiàn)沙門菌和彎曲菌混合感染的現(xiàn)象，混合感染的比例為0.31％。結(jié)果顯示存在彎曲菌和沙門菌共感染的情況，但共感染比例不高。
　　二、基于MLST的不同源彎曲菌和沙門菌分離株流行特征分析
　　為了進一步分析寵物與其它來源彎曲菌和沙門菌的流行特征，明晰寵物家庭中

9、彎曲菌和沙門菌可能的傳播途徑，本研究選取7對管家基因aspA、glnA、gltA、glyA、pgm、tkt和uncA，對來自寵物源、人源和禽源的195株彎曲菌分離株進行MLST分型研究;選取7對管家基因aroC、dnaN、hemD、hisD、purE、sucA、thrA，對64株沙門菌分離株進行MLST分型研究。彎曲菌MLST分型結(jié)果顯示，195株彎曲菌分離株分屬于21種同源復(fù)合體和獨特型，共包含107種ST型。其中共出現(xiàn)16種新序列型

10、，包含空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌各9株。具有同源復(fù)合體的細(xì)菌占總細(xì)菌的85.6％，屬于獨特型的細(xì)菌占總細(xì)菌的14.4％?？漳c彎曲菌的優(yōu)勢ST型為ST-5，優(yōu)勢同源復(fù)合體為ST-353，結(jié)腸彎曲菌的優(yōu)勢ST型為ST-830，屬于ST-828同源復(fù)合體的分離株占結(jié)腸彎曲菌總數(shù)的92.6％。寵物源彎曲菌分離株共46株，被分為28種ST型，分屬于11種同源復(fù)合體和獨特型。三種來源菌株的優(yōu)勢同源復(fù)合體具有一致性，包含兩種及兩種以上來源菌株的同源復(fù)合體

11、有11種，其中10種均含有寵物源菌株，寵物源彎曲菌與其它來源分離株所屬主要同源復(fù)合體相似，表明寵物與其它來源的彎曲菌密切相關(guān)，寵物和禽肉食品源彎曲菌是人彎曲菌感染的主要來源之一。對彎曲菌陽性養(yǎng)寵家庭分離株的MLST分型結(jié)果顯示，B家庭中從寵物犬和草地土壤分離到的結(jié)腸彎曲菌均屬于序列型ST-830，犬源分離株與環(huán)境樣品分離株關(guān)系密切。結(jié)果表明，在一個家庭中，寵物犬感染彎曲菌后，可隨糞便排出至環(huán)境中，從而引起人的感染。
　　將本研究中

12、寵物源空腸彎曲菌MLST分型結(jié)果與PubMLST數(shù)據(jù)庫中選取的130株空腸彎曲菌國際菌株分型結(jié)果進行比較，結(jié)果表明本研究寵物源彎曲菌分型所獲得的同源復(fù)合體與數(shù)據(jù)庫中常見的同源復(fù)合體基本相同，但其中僅有4種序列型與選取的國際菌株所屬序列型相同，即ST-22，ST-45，ST-48和ST-13，其余序列型均不同，表明空腸彎曲菌的分布還具有地域性特征。對不同年份寵物源彎曲菌STs的分布情況進行分析，研究發(fā)現(xiàn)，不同年份間彎曲菌分離株中優(yōu)勢ST型

13、有所不同，年份相差越遠(yuǎn)，屬于同一ST型分離株越少。
　　沙門菌MLST結(jié)果顯示，64株不同來源沙門菌分成了21種不同的ST型，其中包含分離株數(shù)量最多的ST型為ST314，占總數(shù)的28.1％。其余主要的ST型為ST292(12.5％)、ST34(12.5％)和ST155(6.3％)，其他ST型呈散在零星分布。不同來源沙門菌的ST型與血清型之間存在著密切的對應(yīng)關(guān)系，大部分的血清型與ST型間存在著一一對應(yīng)的關(guān)系。三種來源菌株中存在部分S