地西他濱逆轉(zhuǎn)K562-ADR細(xì)胞多藥耐藥性、提高胞內(nèi)阿霉素濃度體外研究.pdf

1、目的:白血病是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤,近年來(lái),其發(fā)病率不斷上升,治療手段主要是造血干細(xì)胞移植和化療。造血干細(xì)胞移植是可能治愈白血病的唯一手段,但由于年齡和供者限制,多數(shù)白血病患者無(wú)法行造血干細(xì)胞移植,但化療易出現(xiàn)耐藥和復(fù)發(fā)。DNA甲基化導(dǎo)致的抑癌基因失活是腫瘤發(fā)生的主要機(jī)制之一。DNA高甲基化在惡性血液病中廣泛存在。多種研究發(fā)現(xiàn)甲基化修飾可以用藥物逆轉(zhuǎn),而去甲基化治療的作用機(jī)理不同于傳統(tǒng)化療和造血干細(xì)胞移植,使提高耐藥和復(fù)發(fā)白血病患者緩解率

2、成為可能。地西他濱(decitabine DCA)是一種2-脫氧胞苷類似物,研究證實(shí)地西他濱有抗腫瘤活性且表現(xiàn)為劑量相關(guān)的雙重機(jī)制,高濃度時(shí)具有細(xì)胞毒作用,低濃度時(shí)具有去甲基化作用。本研究旨在觀察地西他濱聯(lián)合阿霉素(ADR)對(duì)白血病K562耐藥細(xì)胞株多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用,探討其治療白血病的可行性。
　　 方法:以不同濃度的DCA聯(lián)合ADR處理K562/ADR細(xì)胞72小時(shí),同時(shí)設(shè)立僅加入DCA的對(duì)照組1和僅加入ADR的對(duì)照組2,用

3、盼藍(lán)染色方法研究藥物對(duì)K562/ADR細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的影響,用四甲基偶氮唑鹽實(shí)驗(yàn)測(cè)定不同濃度的DCA與不同濃度的ADR對(duì)K562/ADR細(xì)胞的殺傷活性,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)K562/ADR細(xì)胞膜P糖蛋白含量及胞內(nèi)ADR.濃度,以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)方法檢測(cè)K562/ADR細(xì)胞P15INK4B基因的表達(dá),用DNA電泳檢測(cè)K562/ADR

4、細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果:DCA聯(lián)合ADR對(duì)白血病K562/ADR耐藥細(xì)胞株生長(zhǎng)抑制作用,提高了藥物對(duì)K562/ADR細(xì)胞的殺傷活性,觀察到K562/ADR耐藥細(xì)胞株耐藥蛋白表達(dá)降低、胞內(nèi)ADR濃度提高,未檢測(cè)到P15INK4B基因的表達(dá),觀察到經(jīng)DCA聯(lián)合ADR作用后K562/ADR細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)論:
　　 1.DCA聯(lián)合ADR可逆轉(zhuǎn)白血病K562/ADR耐藥細(xì)胞株多藥耐藥性。
　　 2.DCA