涎腺腺樣囊性癌組蛋白乙?；癟SA對(duì)腫瘤細(xì)胞影響的研究.pdf

1、目的: 探討賴氨酸9、18位點(diǎn)乙酰化的組蛋白H3[(acetyl-histone H3 lys9、lys18)以下簡(jiǎn)稱lys9、lys18]在涎腺腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma，ACC)和正常涎腺中表達(dá)的意義及組蛋白去乙?；敢种苿┣乓志谹(TSA)對(duì)ACC-2、ACC-M細(xì)胞增殖、凋亡及其對(duì)ACC-2細(xì)胞中p16INK4a基因啟動(dòng)子甲基化、mRNA、蛋白表達(dá)的影響。 方法: 免

2、疫組織化學(xué)方法檢測(cè)60例ACC和49例正常涎腺中l(wèi)ys9、lys18的表達(dá)并分析其與ACC中E-cadherin、p16INK4a、RASSF1A、DAPK和MGMT基因啟動(dòng)子甲基化、E-cadherin、p16INK4a蛋白表達(dá)及臨床病理特征的關(guān)系。免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)ACC-2、ACC-M細(xì)胞中l(wèi)ys9、lys18的表達(dá)。不同濃度的TSA于不同時(shí)間作用ACC-2、ACC-M細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，觀察細(xì)胞形態(tài)變化，Anne

3、xin V/PI染色和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。甲基化特異性PCR(methylation-specific PCR，MSP)、RT-PCR和實(shí)時(shí)定量PCR(real-time PCR)、Western-blot方法分析100nmol/l TSA不同處理時(shí)間(2h，4h，8h，16h，24h)作用前后ACC-2細(xì)胞中p16INK4a基因啟動(dòng)子甲基化、mRNA、蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果: 正常涎腺中導(dǎo)管細(xì)胞、腺泡細(xì)胞以及AC

4、C腫瘤細(xì)胞中均有l(wèi)ys9、lys18陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)位于細(xì)胞核。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，lys9、lys18在正常涎腺中的表達(dá)明顯高于ACC，且正常涎腺中l(wèi)ys9的表達(dá)較lys18高。ACC中l(wèi)ys9的表達(dá)與p16INK4a啟動(dòng)子甲基化呈顯著負(fù)相關(guān)。Lys9、lys18表達(dá)與ACC的臨床病理特征沒(méi)有相關(guān)性。ACC-M細(xì)胞中無(wú)lys9的表達(dá)，lys9、lys18在ACC細(xì)胞系中的表達(dá)較低。TSA能有效抑制ACC-2、ACC-M細(xì)胞的增殖，使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯

5、改變，抑制作用呈明顯的濃度和時(shí)間依賴性。100nmol/l TSA不同處理時(shí)間作用ACC-2、ACC-M細(xì)胞，細(xì)胞凋亡率逐漸增高，呈時(shí)間依賴性。TSA對(duì)ACC-M的增殖抑制作用強(qiáng)于ACC-2。100nmol/l TSA處理ACC-2細(xì)胞2～16h后，p16INK4a基因啟動(dòng)子甲基化消失；處理2～24h后，p16INK4a mRNA、蛋白表達(dá)顯著增高。 結(jié)論: 組蛋白H3 lys9、18位點(diǎn)低乙?；贏CC腫瘤發(fā)生中發(fā)揮著

6、作用。正常涎腺中組蛋白H3不同位點(diǎn)的乙?；潭炔煌珹CC中組蛋白低乙?；蓞f(xié)同DNA甲基化對(duì)p16INK4a基因發(fā)揮作用，但p16INK4a 基因的失活可能是多種機(jī)制共同參與。TSA能顯著抑制ACC-2、ACC-M的增殖，可作為抗腫瘤的輔助藥物。誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡為T(mén)SA抑制ACC-2、ACC-M增殖的機(jī)制之一。TSA能通過(guò)改變組蛋白乙酰化的水平影響p16INK4a基因啟動(dòng)子甲基化的水平，使p16INK4a基因表達(dá)升高，從而影響細(xì)胞周期，可