飼用菌種（株）的分離鑒定及復(fù)合菌劑降解玉米皮-統(tǒng)糠粗纖維的效果研究.pdf

1、本研究通過從陜北白絨山羊瘤胃液、皺胃液，酸菜，青貯玉米，酵素，微生態(tài)制劑，酵頭，酸奶，乳酸雙歧三聯(lián)片等18個(gè)來源分離鑒定出芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌，采用16S rDNA、18S rDNA保守基因序列分析技術(shù)進(jìn)行菌種鑒定，并對(duì)其培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化。研究了分離出的優(yōu)良菌株不同添加比例在玉米皮-統(tǒng)糠發(fā)酵中的應(yīng)用效果。
　　試驗(yàn)1飼用菌種（株）分離鑒定
　　從陜北白絨山羊瘤胃液、皺胃液，酸菜，青貯玉米，酵素，微生態(tài)制劑，酵母粉、酵頭、

2、酸奶、藥品等18個(gè)來源經(jīng)過形態(tài)學(xué)鑒定以及16S rDNA、18S rDNA保守基因序列分析分離鑒定出芽孢桿菌11個(gè)種，共98株;乳酸菌4個(gè)屬，11個(gè)種，75株;酵母菌2個(gè)種，38株。
　　試驗(yàn)2LB、MRS、察氏培養(yǎng)基的組分優(yōu)化
　　采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化了LB培養(yǎng)基中可溶性淀粉、胰蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉添加量，芽孢桿菌的生長情況較好的配方為:10g蛋白胨、10g酵母提取物、10g氯化鈉溶于1L蒸餾水。
　　優(yōu)化了MRS

3、培養(yǎng)基中葡萄糖、胰蛋白胨、酵母提取物、牛肉膏添加量，乳酸菌生長情況最為旺盛的配方為:10g蛋白胨、15g酵母提取物、20g葡萄糖、5g牛肉膏、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三銨、2gKH2PO4、0.25gMnSO4、0.58gMgSO4、1ml吐溫80溶于1L蒸餾水。
　　優(yōu)化了察氏培養(yǎng)基中蔗糖、蛋白胨、硝酸鈉、磷酸氫二鉀添加量，酵母菌的生長情況相對(duì)最為旺盛的配方為:30g蔗糖、2g蛋白胨、1gNaNO3、2gK2HPO4、0.5gMg

4、SO4、0.5gKCl、0.01gFeSO4溶于1L蒸餾水。
　　試驗(yàn)3芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌優(yōu)勢(shì)菌株的篩選
　　測(cè)定了芽孢桿菌菌株連續(xù)7天的纖維素酶活，并確定了最高酶活力和對(duì)應(yīng)各菌株的最佳產(chǎn)酶時(shí)間，同時(shí)測(cè)定了最佳產(chǎn)酶時(shí)待測(cè)菌株在不同溫度反應(yīng)條件下纖維素酶活力，從中篩選出了6株菌株在20℃-40℃下酶活較高;6株菌株在30℃-50℃下酶活較高;7株菌株在40℃-60℃下酶活較高。
　　測(cè)定了部分乳酸菌菌株的生長曲線和

5、產(chǎn)酸曲線，確定了乳酸菌快速生長及產(chǎn)酸能力較強(qiáng)時(shí)間，并在此基礎(chǔ)上測(cè)定了待測(cè)乳酸菌的產(chǎn)酸能力和生長情況，同時(shí)測(cè)定了它們?cè)诓煌瑴囟扰囵B(yǎng)條件下的生長情況，從中篩選出了7株菌株產(chǎn)酸能力較強(qiáng)，8株菌株在50℃左右生長良好，7株菌株在37℃左右生長迅速，7株菌株在10℃左右生長相對(duì)良好。
　　測(cè)定了部分酵母菌菌株的生長曲線，測(cè)定了不同初始pH對(duì)酵母菌生長的影響，同時(shí)測(cè)定了不同溫度條件下待測(cè)酵母菌生長情況，及37℃培養(yǎng)24h的酵母菌纖維素酶活。從

6、中篩選出7株菌株在50℃左右生長良好，7株菌株在30℃左右生長迅速，8株菌株在10℃左右生長相對(duì)良好，6株菌株纖維素酶活相對(duì)較高。
　　試驗(yàn)4飼用復(fù)合菌劑降解玉米-統(tǒng)糠粗纖維的效果研究
　　試驗(yàn)從前期分離鑒定篩選出的芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌中挑選了出適用于玉米皮-統(tǒng)糠堆積發(fā)酵用的芽孢桿菌JLa，KQ2，KLc，KYG8;乳酸菌ZW22，RQ3，RGJ8;酵母菌JYS2，JL5，JQ10，并連同黑曲霉菌共同發(fā)酵原料，菌株的添加

7、量采用正交設(shè)計(jì)，生產(chǎn)工藝根據(jù)楊凌某飼料生產(chǎn)廠家工藝。發(fā)酵結(jié)束后測(cè)定了9個(gè)組合中粗纖維、粗蛋白、粗灰分、粗脂肪、還原糖、pH，黃曲霉毒素和玉米赤霉素烯酮毒素，利用正交分析對(duì)乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌、黑曲霉菌添加量和發(fā)酵產(chǎn)品中粗纖維、粗蛋白、粗脂肪、還原糖關(guān)系進(jìn)行分析。研究發(fā)現(xiàn)9個(gè)組合中，組合7（乳酸菌、芽孢桿菌、酵母茵、黑曲霉菌的添加量分別為5％、1％、5％、3％）對(duì)玉米皮-統(tǒng)糠粗纖維的降解效果最好，降解率達(dá)45.20％，且正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分