線粒體通透性轉(zhuǎn)換對(duì)原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的影響.pdf

1、目的：在乳鼠原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞上觀察線粒體通透性轉(zhuǎn)換在缺氧/復(fù)氧的不同階段對(duì)心肌細(xì)胞損傷的影響。 方法：新生SD大鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)48h后，采用三氣培養(yǎng)箱建立缺氧/復(fù)氧(H—R)模型。將培養(yǎng)細(xì)胞按孔隨機(jī)分為5組(n=6)并在心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧的不同階段用線粒體通透性轉(zhuǎn)換(MPT)抑制劑CsA處理：對(duì)照組(control)，在37℃的CO2培養(yǎng)箱中孵育5h(95％空氣+5％CO2)；缺氧/復(fù)氧組(H—R)，缺氧(95％N2+5％C

2、O2，PO2<30 mmHg)3h、復(fù)氧(95％空氣+5％CO2)2h；缺氧前處理組(P—H)，缺氧前10min給予1 μ M CsA；復(fù)氧前處理組(P—R)，復(fù)氧前10min給予1 μ M CsA；復(fù)氧后處理組(A—R)，復(fù)氧后15min給予1 μ M CsA。復(fù)氧2h后，采用流式細(xì)胞術(shù)、western blotting法分別觀察心肌細(xì)胞凋亡、線粒體細(xì)胞色素c釋放。復(fù)氧50min后，以Calcein染色心肌細(xì)胞，使用激光共聚焦顯微鏡觀

3、察mPTP的開(kāi)放情況。 結(jié)果：復(fù)氧2h后，對(duì)照組、缺氧/復(fù)氧組、缺氧前處理組、復(fù)氧前處理組、缺氧后處理組細(xì)胞凋亡指數(shù)分別為4.7±1.5、30.3±8.2、15.8±4.2、16.7±4.7、27.8±6.5。缺氧前處理組、復(fù)氧前處理組的細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯低于缺氧/復(fù)氧組(P<0.05)，缺氧后處理組細(xì)胞凋亡指數(shù)與缺氧/復(fù)氧組無(wú)明顯差異；缺氧/復(fù)氧組、缺氧前處理組、復(fù)氧前處理組、缺氧后處理組細(xì)胞胞漿中細(xì)胞色素C的含量分別為314±

4、79、186±46、194±52、289±69，明顯高于對(duì)照組100(P<0.05)，缺氧前處理組、復(fù)氧前處理組明顯低于缺氧/復(fù)氧組(P<0.05)，缺氧后處理組與缺氧/復(fù)氧組無(wú)明顯差異(P>0.05)。缺氧/復(fù)氧組、缺氧前處理組、復(fù)氧前處理組、缺氧后處理組細(xì)胞線粒體中細(xì)胞色素C的含量分別為28±6、84±21、74±19、34±8，缺氧/復(fù)氧組、復(fù)氧前處理組、缺氧后處理組明顯低于對(duì)照組100(P<0.05)，缺氧前處理組、復(fù)氧前處理組

5、明顯高于缺氧/復(fù)氧組(P<0.05)，缺氧后處理組與缺氧/復(fù)氧組無(wú)明顯差異(P>0.05)。復(fù)氧50min后，對(duì)照組、缺氧前處理組、復(fù)氧前處理組Calcein保留在線粒體內(nèi)，胞漿熒光強(qiáng)度較弱，缺氧/復(fù)氧組、缺氧后處理組Calcein從線粒體釋放到胞漿，胞漿熒光強(qiáng)度較強(qiáng)。 結(jié)論： (1)缺氧前和復(fù)氧前CsA處理都可以減輕缺氧/復(fù)氧損傷后的心肌細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生明顯的心肌保護(hù)作用；(2)CsA處理的心肌保護(hù)作用與抑制心肌細(xì)胞MFT以及隨