鼠巨細胞病毒性耳聾新生小鼠螺旋神經(jīng)節(jié)細胞凋亡的研究.pdf

1、目的：顱內(nèi)接種小鼠巨細胞病毒（murine cytomegalovirus，MCMV），建立新生小鼠MCMV性耳聾模型，通過觀察耳蝸感染MCMV時間與各時間窗耳蝸形態(tài)改變、螺旋神經(jīng)節(jié)(spiral ganglion cell，SGN)細胞Bcl-2、Bax表達變化及SGN細胞凋亡，探討MCMV感染導(dǎo)致SGN細胞凋亡從而引起聽力損傷的分子生物學(xué)機制，為今后進一步的研究和臨床治療提供實驗依據(jù)。
　　方法：將新生（出生24h內(nèi)）BALB

2、/C小鼠平均隨機分成兩組:實驗組和對照組。實驗組采用顱內(nèi)注射MCMV懸液法（接種部位注射TCID50為104.15/0.1mL病毒懸液15μl）建立MCMV感染-聽力損傷模型，對照組用同樣的注射方法注射無菌生理鹽水15μl觀察小鼠的生長發(fā)育和存活情況，在建模后的第1天，第3天，第5天，第7天，第14天和第21天分批處死小鼠，分別測定:1.在聲電屏蔽下檢測3周實驗組和對照組小鼠ABRⅠ波波幅、閾值及潛伏期;2.通過光鏡觀察各時間窗小鼠耳蝸

3、組織病理學(xué)變化;3.MCMV-DNA PCR分析各時間窗小鼠耳蝸MCMV感染情況;4.運用免疫組織化學(xué)法檢測各時間窗小鼠耳蝸SGN細胞Bcl-2、Bax基因蛋白質(zhì)的表達;5.采用原位細胞凋亡(TUNEL)法檢測各時間窗小鼠耳蝸SGN細胞凋亡的情況。
　　結(jié)果：1.對照組的小鼠生長發(fā)育良好（皮毛光滑，反應(yīng)靈敏，活動好），實驗組的小鼠生長發(fā)育緩慢（皮毛凌亂稀疏、睜眼延遲、反應(yīng)略遲鈍、活動差、體態(tài)略消瘦）;2.實驗組與對照組小鼠相比AB

4、RⅠ波潛伏期延長、波幅降低、閾值升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;3.光鏡下實驗組小鼠建模后3天，耳蝸即出現(xiàn)鼓階明顯充血，并伴有炎性細胞浸潤;建模后第7天螺旋神經(jīng)節(jié)細胞排列稀疏，細胞間隙變寬，并一直持續(xù)至注射后第21天，對照組小鼠耳蝸均無上述變化;4.實驗組建模后1天MCMV-DNA PCR檢測陰性，其余各時間點MCMV-DNA PCR檢測為陽性;對照組各時間點MCMV-DNA PCR檢測為陰性;5.實驗組與對照組相比，Bcl-

5、2表達降低，Bax表達升高，Bcl-2/Bax比值降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;6.實驗組從建模后第3天起，平均細胞凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），建模后1周為其AI高峰。
　　結(jié)論：新生乳鼠顱內(nèi)注射MCMV后可促使SGN細胞發(fā)生凋亡，高峰約在建模后1周左右，其作用機制可能是通過激活JNK信號途徑非核通路，下調(diào)Bcl-2，上調(diào)Bax來促使螺旋神經(jīng)節(jié)細胞發(fā)生