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1、目的:研究巰基氧化還原試劑對(duì)INS-1細(xì)胞株胰島素分泌的影響及其可能的分子機(jī)制。
方法:1.傳代培養(yǎng)胰島素分泌細(xì)胞株大鼠細(xì)胞素瘤INS-1細(xì)胞,將其種植在24孔板上,待其生長(zhǎng)匯合至70-80%時(shí)分組進(jìn)行胰島素分泌實(shí)驗(yàn)。
2.應(yīng)用胰島素放射免疫分析技術(shù)觀察2,2'-二硫二吡啶(DTDP)、2-2'-二硫代雙(DTBNP)和二硫蘇糖醇(DTT)對(duì) INS-1細(xì)胞葡萄糖刺激的胰島素分泌的影響。
3.應(yīng)用胰島素放射
2、免疫分析技術(shù)觀察DTDP、DTBNP和DTT對(duì)INS-1細(xì)胞KCl刺激的胰島素分泌的影響。
4.應(yīng)用胰島素放射免疫分析技術(shù)分別觀察硝苯地平(Nifedipine)阻斷L-型CaV通道、IP3受體和二氮嗪(Diazoxide)阻斷KATP通道對(duì)DTDP、DTBNP調(diào)節(jié)INS-1細(xì)胞葡萄糖刺激的胰島素分泌的影響。
5.應(yīng)用胰島素放射免疫分析技術(shù)分別觀察硝苯地平(Nifedipine)阻斷L-型CaV通道、IP3受體和二氮
3、嗪(Diazoxide)阻斷KATP通道對(duì)DTDP、DTBNP調(diào)節(jié)INS-1細(xì)胞KCl刺激的胰島素分泌的影響。
結(jié)果:1.在INS-1細(xì)胞的胰島素分泌實(shí)驗(yàn)中DTDP、DTBNP均能增加葡萄糖刺激的胰島素分泌,且均可以被DTT所消除;
2.在INS-1細(xì)胞的胰島素分泌實(shí)驗(yàn)中DTDP、DTBNP均能增加KCl刺激的胰島素分泌,且均可以被DTT所消除;
3.在Nifedipine預(yù)先處理的INS-1細(xì)胞胰島素分泌
4、實(shí)驗(yàn)中DTDP、DTBNP均能增加葡萄糖刺激的胰島素分泌,但胰島素分泌增加幅度低于無(wú)Nifedipine處理組;4.在Diazoxide預(yù)先處理的INS-1細(xì)胞胰島素分泌實(shí)驗(yàn)中DTDP、DTBNP均能增加葡萄糖刺激的胰島素分泌,但胰島素分泌增加幅度低于無(wú)Diazoxide處理組。
5.在Nifedipine預(yù)先處理的INS-1細(xì)胞胰島素分泌實(shí)驗(yàn)中DTDP、DTBNP均能增加KCl刺激的胰島素分泌,但胰島素分泌增加幅度低于無(wú)Ni
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