重慶地區(qū)動物BDV感染的分子生物學(xué)研究.pdf

1、第一部分重慶地區(qū)家兔博爾納病病毒自然感染狀況研究。 目的：檢測重慶地區(qū)家兔博爾納病病毒(Borna Disease Virus，BDV)隱性帶毒情況。分析該BDV的可能種系來源及其與標(biāo)準(zhǔn)株strain V/FR、strain He/80/FR和strain H1766的同源性。 方法：采用巢式逆轉(zhuǎn)錄酶PCR結(jié)合熒光定量PCR(Real-timenRT-PCR)檢測重慶地區(qū)60例健康家兔腦組織BDV P24基因片段，并對其

2、中的陽性產(chǎn)物進行基因序列測定，然后用BLAST軟件以及DNAstar V6.13 EditSeq軟件對測序結(jié)果進行分析。 結(jié)果：2例家兔為陽性。該BDV P24片段的核苷酸序列與馬源BDVstrain H1766株同源性最高，為97.67％，與標(biāo)準(zhǔn)株strain V/FR和strainHe/80/FR同源性均為96.51％，但是它們編碼的氨基酸相同。 結(jié)論：重慶地區(qū)家兔中存在動物源性BDV隱性感染，該BDV P24核苷酸

3、序列與strain V/FR和strain He/80/FR具有高度同源性。但是與馬源的strain H1766同源性最高。 第二部分重慶地區(qū)狗博爾納病病毒自然感染狀況的初步探討。 目的：初步了解重慶地區(qū)狗BDV的隱性感染情況，對檢測到的陽性片段進行核苷酸序列比對，探討其可能的種系來源及其與國外公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)株strain V/FR、strain He/80/FR和strain H1766的同源性。 方法：采用Real-

4、time nRT-PCR檢測重慶地區(qū)40例健康狗腦組織(右側(cè)前額葉)BDV P24基因片段，并對其中的陽性產(chǎn)物進行基因序列測定，然后用BLAST軟件以及DNAstar V6.13 EditSeq軟件對測序結(jié)果進行分析。 結(jié)果：5例狗為陽性。該BDV P24片段的核苷酸序列與標(biāo)準(zhǔn)株strainH1766和strain V/FR同源性最高，為97.67％。與strain He/80/FR的同源性為94.19％，與已有報道的奧地利狗源

5、BDV同源性為95.35％。但是它們編碼的氨基酸相同。 結(jié)論：重慶地區(qū)狗中存在動物源性BDV的隱性感染，該BDV P24核苷酸序列與strain H1766、strain V/FR和strain He/80/FR具有高度同源性。 第三部分重慶地區(qū)鴿子博爾納病病毒自然感染狀況的研究。 目的：初步了解重慶地區(qū)鴿子博爾納病病毒(Boma DiseaseVirus，BDV)隱性感染狀況，對其感染的病毒株進行核苷酸序列比對

6、，探討其可能的種系來源以及與國外公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)株strain V/FR、strainHe/80/FR和strain H1766的同源性。 方法：本研究采用Real-time nRT-PCR技術(shù)對重慶地區(qū)60只鴿子的外周血單核細胞(PBMCs)中的BDV P24基因片段進行了檢測，并且對陽性PCR產(chǎn)物進行測序。然后用BLAST軟件以及DNAstar V6.13EditSeq軟件對該片段進行核苷酸比對及序列分析。 結(jié)果：四例樣本

7、為陽性。該BDV P24片段的核苷酸序列與法國狐貍分離的BDV同源性最高，為97.67％。與標(biāo)準(zhǔn)株strain V/FR和strainHe/80/FR的同源性都是96.51％，與strain H1766同源性僅為95.35％。但是它們編碼的氨基酸相同。 結(jié)論：本研究表明重慶地區(qū)鴿子存在博爾納病病毒的隱性感染，其感染病毒的P24核苷酸片段與swain V/FR、strain He/80/FR以及strainH1766等國際公認(rèn)的標(biāo)