川芎嗪對妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥患者血管內(nèi)皮生長因子表達的作用.pdf

1、目的:1.研究妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥(ICP)患者血清對臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)分泌血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的影響,探討VEGF與妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥發(fā)病的關(guān)系.2.檢測中藥川芎嗪對VEGF表達的影響,并為川芎嗪用于預(yù)防和治療妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥提供理論依據(jù).方法:1.用膠原酶灌注法行原代HUVEC培養(yǎng),Giemsa染色行形態(tài)學觀察,用鼠抗人第Ⅷ因子抗體進行內(nèi)皮細胞鑒定及純度分析.2.選取ICP患者22例及正常孕婦13例,抽取靜脈血清,

2、追蹤隨訪至妊娠結(jié)局,統(tǒng)計兩組臨床特征.隨機選取各12例進行以下實驗.3.MTT法檢測不同濃度的ICP患者血清及正常孕婦血清(0％、5％、10％、15％、20％)對內(nèi)皮細胞活力的影響;檢測不同濃度的川芎嗪(0 μg/ml、25 μg/ml、50 μ g/ml、100 μ g/ml、200 μ g/ml)對20％ICP患者血清孵育的內(nèi)皮細胞活力的影響,并與20％正常孕婦血清對照.4.ELISA法檢測不同濃度的ICP血清及正常孕婦血清(10％

3、,20％)作用不同時間(12小時、24小時、36小時)對內(nèi)皮細胞分泌的VEGF蛋白的影響.5.用不同濃度的川芎嗪(0 μ g/ml、25 μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)干預(yù)20％ICP患者血清孵育的內(nèi)皮細胞,用ELISA及免疫細胞化學技術(shù)分別檢測細胞培養(yǎng)上清及胞漿中的VEGF蛋白量,并與20％正常孕婦血清對照.結(jié)果:1.MTT實驗結(jié)果顯示,隨著血清濃度的升高,ICP組內(nèi)皮細胞OD<,490>值逐漸減低,

4、而正常孕婦組內(nèi)皮細胞OD<,490>值逐漸增高.兩組5％濃度組OD<,490>值與0％濃度組比較P>0.05;10％、15％、20％濃度組OD<,490>值與0％濃度組比較P<0.05.隨著川芎嗪濃度的升高,內(nèi)皮細胞OD<,490>值逐漸增加(P<0.05),到100 μg/ml達到高峰.2.ELISA實驗結(jié)果顯示:隨著血清濃度的增加,作用時間的延長,ICP組內(nèi)皮細胞分泌VEGF逐漸減少(P<0.05),而正常孕婦組內(nèi)皮細胞分泌VEGF

5、逐漸增多(P<0.05).3.ELISA及免疫細胞化學實驗結(jié)果顯示隨著川芎嗪藥物濃度的增加,內(nèi)皮細胞分泌的VEGF蛋白逐漸增多(P<0.05),到100 μg/ml達到高峰.4.ICP組與正常孕婦組臨床特征比較:ICP組新生兒體重顯著低于正常孕婦組,羊水糞染程度顯著高于正常孕婦組,差異有統(tǒng)計學意義.結(jié)論:1. ICP患者血清對血管內(nèi)皮細胞具有毒性作用,使細胞生長受限,活細胞數(shù)量減少,并呈濃度依賴性.2.ICP患者血清對血管內(nèi)皮細胞分泌V

6、EGF蛋白有抑制作用,此作用呈濃度,時間依賴性.ICP患者血清對內(nèi)皮細胞的毒性作用可能是由于抑制了內(nèi)皮細胞分泌VEGF蛋白所致.3.川芎嗪對ICP患者血清損傷的內(nèi)皮細胞有保護作用,此作用隨藥物濃度增加逐漸增大,到100 μg/ml達到高峰.4.川芎嗪可以拮抗ICP患者血清抑制內(nèi)皮細胞分泌VEGF的作用,此作用隨藥物濃度增加逐漸增大,到100 μg/ml達到高峰.5.川芎嗪對ICP患者血清損傷的內(nèi)皮細胞的保護作用可能是由于促進了內(nèi)皮細胞分