SKBR-3乳腺癌細胞中Hsp70與Her-2蛋白復合物的鑒定及其提取純化.pdf

1、乳腺癌是嚴重威脅婦女健康的疾病，占女性惡性腫瘤死亡率的首位，近年來，國內外大量研究顯示：原癌基因Her—2在20％～30％的乳腺癌患者中可見擴增和過度表達，該基因的擴增及其過表達常提示腫瘤惡性程度高，可作為判斷乳腺癌預后的一個獨立指標。此外，大量研究表明，來源于腫瘤的組織或細胞中存在一種或多種不同水平熱休克蛋白的表達，其中熱休克蛋白70與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關。隨著對熱休克蛋白70結構、功能以及與其相關蛋白作用的了解，為腫瘤治療的研究

2、打開了新局面。本論文以SKBR—3乳腺癌細胞株為主要細胞株，探討了Hsp70—Her2蛋白復合物的鑒定、提取及純化的方法，擬建立一個穩(wěn)定、高效的分離、純化技術平臺，為探索新的乳腺癌個體化免疫治療奠定理論及實驗基礎。 本文以高表達原癌基因Her—2的乳腺癌細胞株SKBR—3作為實驗細胞，經流式細胞技術檢測其中Her—2的表達情況，結果顯示原癌基因Her—2在SKBR—3細胞株中高表達。經免疫共沉淀方法檢測細胞株中Hsp70和Her

3、—2癌基因蛋白的存在形式：Her—2癌基因蛋白與Hsp70在細胞株中以復合物的形式存在。采用裂解液裂解、超聲破碎、高速離心、ConA Sepharose親和層析結合ADP agarose親和層析方法，從熱休克（42℃）處理后的人乳腺癌細胞株SKBR—3中分離純化出Hsp70/Her—2癌基因蛋白復合物，并通過十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）、Westem—blot點印記進行檢測，最后用PEG20000濃縮蛋白后用B