8-氯腺苷和TRAIL對(duì)死亡受體DR5的表達(dá)調(diào)控機(jī)制.pdf

1、腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(tumor necrosis factor-relatedapoptosis-inducing ligand，TRAIL)是近年來新發(fā)現(xiàn)的TNF超家族成員，能特異性地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但對(duì)大多數(shù)正常細(xì)胞沒有細(xì)胞毒性反應(yīng)。TRAIL通過與細(xì)胞表面的死亡受體DR4或DR5的結(jié)合傳遞凋亡信號(hào)。TRAIL同源三聚體引起靶細(xì)胞表面DR4或DR5的三聚化，F(xiàn)ADD結(jié)合到三聚化的受體胞內(nèi)死亡結(jié)構(gòu)域，并作為接頭分子招募pr

2、o-caspase 8，起始包含其它c(diǎn)aspase的蛋白水解級(jí)聯(lián)，最終通過凋亡導(dǎo)致細(xì)胞死亡。8-氯腺苷(8-Cl-Ado)是一種腺苷類似物，對(duì)多種惡性腫瘤具有抑制生長(zhǎng)和誘導(dǎo)凋亡的作用。本實(shí)驗(yàn)室的前期工作發(fā)現(xiàn)，亞毒性劑量的8-Cl-Ado可增強(qiáng)肝癌細(xì)胞BEL-7402對(duì)rsTRAIL的敏感性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，并上調(diào)死亡受體DR5的表達(dá)。但8-Cl-Ado和rsTRAIL對(duì)DR5表達(dá)調(diào)控的機(jī)制還不清楚。尤其目前對(duì)8-Cl-Ado的研究很有

3、限，還未鑒定出8-Cl-Ado應(yīng)答的順式元件和轉(zhuǎn)錄因子，8-Cl-Ado調(diào)控基因表達(dá)的分子機(jī)制也不清楚。為了進(jìn)一步闡明8-Cl-Ado和rsTRAIL的協(xié)同作用機(jī)制和對(duì)DR5表達(dá)的調(diào)控機(jī)制，本文主要做了兩方面的研究：一．8-Cl-Ado對(duì)死亡受體DR5的表達(dá)調(diào)控；二．rsTRAIL對(duì)死亡受體DR5的表達(dá)調(diào)控。 本研究發(fā)現(xiàn)8-Cl-Ado上調(diào)TRAIL死亡受體DR5的mRNA和蛋白表達(dá)水平。熒光素酶報(bào)告基因分析顯示，8-Cl-Ad

4、o可以增強(qiáng)DR5啟動(dòng)子活性。通過構(gòu)建DR5啟動(dòng)子5’刪除系列報(bào)告質(zhì)粒，將8-Cl-Ado應(yīng)答順式作用元件定位于DR5啟動(dòng)子-207/-145區(qū)域。凝膠阻滯試驗(yàn)和染色質(zhì)免疫共沉淀結(jié)果顯示，8-Cl-Ado可以增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子Sp1與DR5啟動(dòng)子-207/-145區(qū)域的結(jié)合，但不影響NFκB的活性。因此，8-Cl-Ado對(duì)死亡受體DR5的調(diào)控可能是通過促進(jìn)Sp1與DR5啟動(dòng)子的結(jié)合而實(shí)現(xiàn)的。 本研究還發(fā)現(xiàn)rsTRAIL也可以在轉(zhuǎn)錄水平上

5、上調(diào)DR5的表達(dá)，熒光素酶報(bào)告基因分析顯示，rsTRAIL不能增強(qiáng)DR5啟動(dòng)子活性，提示DR5啟動(dòng)子中沒有rsTRAIL應(yīng)答元件。凝膠阻滯試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)rsTRAIL可以激活轉(zhuǎn)錄因子NFκB。因此rsTRAIL可能通過DR5內(nèi)含子中的NFκB結(jié)合位點(diǎn)調(diào)控DR5的表達(dá)。 在8-Cl-Ado與rsTRAIL的協(xié)同作用中，8-Cl-Ado促進(jìn)Sp1的轉(zhuǎn)錄活性，rsTRAIL激活NFκB，兩者共同促進(jìn)了TRAIL受體DR5的表達(dá)，使細(xì)胞對(duì)rs

6、TRAIL誘導(dǎo)的凋亡更加敏感。此外，本研究鑒定出兩段對(duì)DR5基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄非常重要的啟動(dòng)子區(qū)域：-488/-377和-207/-144，缺失以上區(qū)域?qū)?dǎo)致啟動(dòng)子活性顯著下降，其中-207/-144包含最小啟動(dòng)子區(qū)域。另外，-377/-270區(qū)域可能含有抑制DR5基因表達(dá)的順式元件。 本實(shí)驗(yàn)首次報(bào)道了化療藥物8-Cl-Ado調(diào)控基因表達(dá)的分子機(jī)制以及對(duì)8-Cl-Ado應(yīng)答的順式作用元件和轉(zhuǎn)錄因子。這一研究成果為深入理解化療藥物促進(jìn)腫瘤細(xì)