CD147調(diào)控阿霉素介導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、背景:
　　CD147是一種重要的腫瘤基因治療的靶分子，在多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生MMPs、VEGF，與MCT、Integrin、Cyclophilins、Caveolin-1相互作用，影響著腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移及血管新生，并在腫瘤的凋亡、多藥耐藥形成中發(fā)揮重要的作用。CD147與乳腺癌密切相關(guān)，在乳腺癌中高表達(dá)，與乳腺癌的病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)聯(lián)，并與乳腺癌患者生存期相關(guān)，有Logistic回歸分析顯示患者的

2、生存期會(huì)隨著CD147高表達(dá)而縮短。研究CD147是否調(diào)控化療藥物誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞的凋亡對(duì)乳腺癌的治療具有一定的意義。
　　目的:
　　探討CD147對(duì)阿霉素介導(dǎo)的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法:
　　1.將含有CD147及GFP全長(zhǎng)cDNA的質(zhì)粒用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)入乳腺癌MCF-7細(xì)胞，并設(shè)置空載(僅含GFP全長(zhǎng)cDNA)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組作為對(duì)照。用Westemblot的方法檢測(cè)CD147轉(zhuǎn)染組及空載質(zhì)

3、粒轉(zhuǎn)、染組細(xì)胞中CD147蛋白水平的變化、用熒光顯微鏡觀察CD147轉(zhuǎn)染組MCF-7細(xì)胞的GFP表達(dá)情況，以驗(yàn)證CD147質(zhì)粒是否成功轉(zhuǎn)入MCF-7細(xì)胞.
　　2.將CD147質(zhì)粒用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)入乳腺癌MCF-7細(xì)胞，并設(shè)置空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組作為對(duì)照。隨后以不同濃度的阿霉素處理兩組細(xì)胞，時(shí)間為48h。MTT法測(cè)定不同濃度的阿霉素對(duì)兩組細(xì)胞增殖的影響。
　　3.用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD147轉(zhuǎn)染組+可霉素，空載組+可霉素細(xì)胞的凋亡

4、。
　　4.將CD147轉(zhuǎn)染組及空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞加入不同濃度阿霉素(0μM、1μM)，分別標(biāo)記為:CD147轉(zhuǎn)染組、空載組。用Westemblot的方法檢測(cè)各組細(xì)胞中CD147，Cleaved PARP蛋白水平的變化。
　　結(jié)果:
　　1.Westemblot試驗(yàn)證實(shí)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞無(wú)CD147表達(dá)，CD147質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)入MCF-7細(xì)胞并表達(dá)CD147。熒光顯微鏡下觀察CD147轉(zhuǎn)染組MCF-7細(xì)胞表達(dá)綠

5、色熒光蛋白，也驗(yàn)證了CD147質(zhì)粒成功的轉(zhuǎn)染入MCF-7細(xì)胞。
　　2.MTT的結(jié)果表明:阿霉素能抑制MCF-7空載組細(xì)胞、CD147轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的增殖能力，并且隨阿霉素濃度的增加，抑制能力也逐漸增強(qiáng)。在相同濃度下，阿霉素對(duì)MCF-7空載組細(xì)胞抑制率高于CD147轉(zhuǎn)染組細(xì)胞。MCF-7空載組細(xì)胞IC50=1.579±0.0257μM，CD147轉(zhuǎn)染組細(xì)胞IC50=2.204±0.0391μM。說(shuō)明CD147對(duì)MCF-7細(xì)胞的凋亡有抑

6、制作用。根據(jù)IC50的值，選取1μM的阿霉素進(jìn)行后續(xù)的細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)。
　　3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD147轉(zhuǎn)染組MCF-7細(xì)胞的凋亡率為8.38±1.09％，明顯低于空載組(P＜0.05)，而空載組凋亡率是21.17±1.35％，說(shuō)明CD147對(duì)MCF-7細(xì)胞的凋亡有抑制作用。
　　4.阿霉素(0μM、1μM)處理空載組細(xì)胞及CD147轉(zhuǎn)染組細(xì)胞48h后，其兩組細(xì)胞Cleaved PARP表達(dá)水平隨阿霉素濃度增加均上調(diào)，CD14