八種鯉科魚類RNase1基因克隆與表達研究.pdf

1、RNase1是動物胰臟分泌的一種重要的消化酶，是胰核糖核酸酶家族的重要成員。因在葉猴中發(fā)現(xiàn)其多拷貝與葉食性密切相關(guān)，而成為食性研究的熱點基因之一。鯉科魚類是我國重要的經(jīng)濟魚類，食性廣泛。本研究選取鯉（Cyprinus carpio）、黃尾鲴（Xenocypris davidi）、鳙(Aristichthys nobilis)、鰱（Hypophthalmichthys molitriac）、草魚（Ctenopharyngodon idel

2、lus）、團頭魴（Megalobrama amblycephala）、鳡（Elopichthys bambusa）、翹嘴鲌（Cluter alburnus）8種鯉科魚類為實驗對象，采用染色體步移（Genome walking）的方法克隆了8種魚RNase1基因的蛋白編碼區(qū)（CDS區(qū)）全長，分析了這8種魚不同組織RNase1基因的表達差異，分析了鯉、團頭魴、鳙和翹嘴鲌不同組織RNase1蛋白的表達差異，獲得如下結(jié)果:
　　(1)8種

3、鯉科魚類RNase1基因的克隆和理化性質(zhì)分析。鯉RNase1基因序列總長度為940 bp，其中CDS序列長度447 bp，編碼149個氨基酸，預(yù)測分子量為17.49KDa，理論等電點(PI)為9.10;黃尾鲴RNase1基因序列總長度為1401 bp，其中CDS序列長度456 bp，編碼152個氨基酸，預(yù)測分子量為17.49 KDa，PI為9.10;鳙RNase1基因序列總長度為2014 bp，其中CDS序列長度456 bp，編碼152

4、個氨基酸，預(yù)測分子量為17.33 KDa，PI為8.53;鰱RNase1基因序列總長度為2756 bp，其中CDS序列長度456 bp，編碼152個氨基酸，預(yù)測分子量為17.26 KDa，PI為8.78;草魚RNase1基因序列總長度為1033 bp，其中CDS序列長度456 bp，編碼152個氨基酸，預(yù)測分子量為16.80 KDa，PI為9.05;團頭魴RNase1基因序列總長度為856 bp，其中CDS序列長度456 bp，編碼15

5、2個氨基酸，預(yù)測分子量為17.32 KDa，PI為9.11;鳡RNase1基因序列總長度為1439 bp，其中CDS序列長度456bp，編碼152個氨基酸，預(yù)測分子量為17.40 KDa，PI為9.11;翹嘴鲌RNase1基因序列總長度為1643 bp，其中CDS序列長度456 bp，編碼152個氨基酸，預(yù)測分子量為17.26 KDa，PI為8.94。BLAST分析顯示8種鯉科魚類間的RNase1基因編碼的氨基酸序列相似度較高(65.7

6、％～99.2％)，均具有24個氦基酸左右的信號肽序列，保守的“CKXXNTF”功能區(qū)，3個催化堿基（1個賴氨酸和2個組氨酸）形成催化三聯(lián)體，同時包括6個半胱氨酸形成3個二硫鍵。氨基酸進化樹顯示團頭魴與翹嘴鲌關(guān)系最為接近，鳡與黃尾鲴接近，鰱鳙接近，它們都與青鳉差異最大。
　　(2)熒光定量實驗采用β-actin為內(nèi)參基因，結(jié)果顯示:肌肉組織中PNase1基因在鳙的表達量最高，團頭魴最低，鰱和鳙高于其它魚類;性腺、心臟、肝、脾、腎中，

7、鰱和鳙RNase1基因的表達量與其它魚類差異顯著(P＜0.05);鰓、腦、腸道中，鳙RNase1基因表達量較高，與其它魚類差異顯著;血液中，翹嘴鲌RNase1基因表達量較高，與其它魚類差異顯著;除鳡以外其它鯉科魚類均呈現(xiàn)腸RNase1基因表達量最高，與其它組織表達差異顯著(P＜0.05)，肝、腎的RNase1基因表達量也相對其它組織較高。其中鰱和鳙血液中的RNase1基因表達量也相對較高。
　　(3)為了研究不同組織RNase蛋白