日本毛連菜化學(xué)成分研究.pdf

1、日本毛連菜(Picris japoncia Thunb.)為菊科毛連菜屬植物，又名羊下巴。生于山坡草地、灌叢中或田邊、河邊，分布于黑龍江、內(nèi)蒙古及山西等地，其中山西主要分布在太原及周邊縣市、交城、五臺等地區(qū)。全草入蒙藥，具有清熱、消腫及止痛作用，據(jù)《西藏常用中草藥》記載日本毛連菜苦、咸、微溫，入肺經(jīng)，理肺止咳、化痰平喘、寬胸，治咳嗽痰多、咳喘、噯氣、胸腹悶脹等，臨床用于瘟疫、結(jié)喉、乳腺炎、腦刺痛、腮腺炎、陣刺痛等。目前國內(nèi)學(xué)者對興安毛連

2、菜染色體核型做了分析，研究了興安毛連菜系統(tǒng)演化位置和相近種親緣關(guān)系；國外研究表明毛連菜（Picris hieracioides subsp）花中主要含內(nèi)酯，全草含毛連菜苷；課題組前期對日本毛連菜進(jìn)行了降血糖藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)研究，并且篩選了日本毛連菜降血糖有效部位，同時對其抗糖尿病腎病作用以及降糖機(jī)制進(jìn)行了研究。為了更好的開發(fā)利用這一藥用植物資源，本課題主要研究內(nèi)容包括日本毛連菜化學(xué)成分研究、日本毛連菜不同部位化學(xué)成分含量測定、抗氧化能力分

3、析和抗血管生成活性篩選以及日本毛連菜提取物乙酸乙酯部位指紋圖譜分析。
　　 1.日本毛連菜化學(xué)成分研究
　　 通過運(yùn)用硅膠柱層析等方法，對日本毛連菜化學(xué)成分進(jìn)行了初步分離，從中分離出十個化合物，利用波譜學(xué)等方法并與文獻(xiàn)報(bào)道的相對應(yīng)數(shù)據(jù)比對從中鑒定出3個化合物，分別為熊果酸、蘆丁、丁香苷，這三個化合物均為首次在日本毛連菜中發(fā)現(xiàn)。
　　 2.日本毛連菜不同部位化學(xué)成分含量測定
　　 根據(jù)物質(zhì)特定的理化鑒定反應(yīng)

4、，對日本毛連菜不同部位進(jìn)行化學(xué)成分定性分析，結(jié)果表明日本毛連菜不同部位含有一定量的生物堿、黃酮、酚醌、甾萜、皂苷和少量的多糖及內(nèi)酯類。
　　 對日本毛連菜不同部位的化學(xué)成分進(jìn)行含量測定，采用硝酸鋁絡(luò)合分光光度法，以蘆丁為對照測定日本毛連菜各部位中黃酮的含量，并進(jìn)行顯色穩(wěn)定性、精密度、重復(fù)性和加樣回收率實(shí)驗(yàn)；采用福林法以沒食子酸為對照測定日本毛連菜各部位中多酚的含量；以香草醛-冰醋酸溶液為顯色劑，齊墩果酸為對照測定日本毛連菜中皂苷

5、的含量。結(jié)果表明日本毛連菜中乙酸乙酯部位中黃酮類成分最多，皂苷類和多酚類主要集中在正丁醇部位和水部位。
　　 3.日本毛連菜不同部位抗氧化能力分析
　　 對日本毛連菜不同部位的抗氧化能力進(jìn)行分析，利用TBA法測定日本毛連菜不同部位對二價鐵離子誘發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的抑制作用；采用鄰二氮菲-二價鐵離子氧化法檢測日本毛連菜不同部位對H2O2/Fe2+產(chǎn)生的羥基自由基的清除能力；采用DPPH·法測定日本毛連菜不同部位對DPPH·

6、的清除率；運(yùn)用K3Fe(CN)6法測定日本毛連菜不同部位的還原能力。結(jié)果表明，日本毛連菜不同部位在體外具有一定的抗脂質(zhì)過氧化效應(yīng)和還原能力，可抑制·OH、O2·-自由基的產(chǎn)生和較強(qiáng)的DPPH·清除能力，進(jìn)而確定乙酸乙酯和正丁醇部位為抗氧化能力較強(qiáng)部位。
　　 4.日本毛連菜不同部位抗血管生成活性篩選
　　 利用斑馬魚模型對日本毛連菜不同部位的抗血管生成活性進(jìn)行篩選，以抑制率為指標(biāo)來衡量藥物對斑馬魚血管生成的抑制作用。結(jié)果

7、表明在試驗(yàn)設(shè)計(jì)的三個劑量范圍內(nèi)，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下日本毛連菜不同部位均顯示出了抑制斑馬魚體節(jié)間血管生成的活性，而日本毛連菜水部位、石油醚部位和正丁醇部位的抑制活性隨著藥物濃度的增加活性增強(qiáng)，但是乙酸乙酯部位則顯示了不同的規(guī)律，這可能與此部位中某些成分量的變化有關(guān)。因此日本毛連菜不同部位在抗血管生成方面有一定的作用，這對日本毛連菜單一化學(xué)成分抗腫瘤活性篩選具有一定的指導(dǎo)意義。
　　 5.日本毛連菜提取物乙酸乙酯部位指紋圖譜研究

8、r>　　 采用HPLC方法，通過對精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性等方法學(xué)考察，以乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動相進(jìn)行梯度洗脫，建立日本毛連菜提取物乙酸乙酯部位指紋圖譜，比較其色譜圖，確定共有指紋峰，并采用計(jì)算機(jī)軟件對色譜峰數(shù)據(jù)進(jìn)行相似度評價。研究結(jié)果表明：十批樣品指紋圖譜11個共有峰的相對保留時間RSD值均小于3％，指紋圖譜相似度達(dá)92％以上，為日本毛連菜提取物乙酸乙酯部位質(zhì)量控制提供了依據(jù)。
　　 為了更好全面的研究日本毛連菜所屬菊