聚乙烯亞胺包被的四氧化三鐵磁性納米顆粒對(duì)SHI-1細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及體內(nèi)初步成像.pdf

1、一、聚乙烯亞胺包被的四氧化三鐵磁性納米顆粒對(duì)SHI-1細(xì)胞生物學(xué)特性的影響
　　目的：初步探討聚乙烯亞胺包被的四氧化三鐵（PEI-Fe3O4）磁性納米顆粒對(duì)白血病細(xì)胞株SHI-1的生物學(xué)特性的影響，探究磁共振細(xì)胞影像技術(shù)跟蹤細(xì)胞生物學(xué)行為的可行性。
　　方法：（1）、以人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株SHI-1為對(duì)象，用透射電鏡觀察PEI-Fe3O4磁性納米顆粒能否被細(xì)胞內(nèi)吞；（2）、用電感耦合等離子發(fā)射光譜儀及普魯士藍(lán)染色觀察細(xì)

2、胞納米顆粒載量的影響因素；（3）、用CCK-8法檢測(cè)PEI-Fe3O4磁性納米顆粒對(duì)SHI-1細(xì)胞增殖的影響；用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)PEI-Fe3O4磁性納米顆粒對(duì)細(xì)胞分化、凋亡的影響；以甲基纖維素半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)法檢測(cè)PEI-Fe3O4磁性納米顆粒對(duì)細(xì)胞集落形成能力的影響；（4）、以transwell跨膜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PEI-Fe3O4磁性納米顆粒對(duì)SHI-1細(xì)胞侵襲能力的影響；以熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)PEI-Fe3O4磁性納米顆粒對(duì)S

3、HI-1細(xì)胞MMP-2、MMP-9、CD44、CXCR4、TIMP-1、TIMP-2 mRNA表達(dá)水平的影響；以未經(jīng)PEI-Fe3O4磁性納米顆粒處理的SHI-1細(xì)胞作為對(duì)照組。
　　結(jié)果：（1）、PEI-Fe3O4磁性納米顆粒能成功被 SHI-1細(xì)胞內(nèi)吞；（2）、細(xì)胞內(nèi)磁性納米顆粒載量與其起始濃度及與細(xì)胞共培養(yǎng)的時(shí)間呈正相關(guān)，隨細(xì)胞分裂傳代而減少。（3）、以5~100μg Fe/ml PEI-Fe3O4處理細(xì)胞，60~100μg

4、 Fe/ml組對(duì)細(xì)胞的抑制率高于5~50μg Fe/ml組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；30μg Fe/ml PEI-Fe3O4處理SHI-1后，和對(duì)照組相比，在TPA誘導(dǎo)分化前后的CD11b和CD14表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（P>0.05）；以0、20、50μg Fe/ml PEI-Fe3O4處理24h后的SHI-1細(xì)胞的集落形成率，在各組間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；（4）、以0~50μg Fe/ml PEI-Fe3O

5、4處理SHI-1細(xì)胞24h，細(xì)胞凋亡率隨 PEI-Fe3O4濃度的增加而增高（P<0.05），實(shí)驗(yàn)組SHI-1細(xì)胞侵襲能力較對(duì)照組顯著下降（P<0.05），測(cè)量標(biāo)記細(xì)胞的MMP-2、MMP-9、CD44、CXCR4、TIMP-1、TIMP-2 mRNA表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)TIMP-2表達(dá)下調(diào)，MMP-9表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論：（1）、PEI-Fe3O4磁性納米顆?？筛咝蕵?biāo)記SHI-1細(xì)胞；
　?。?）、在5~50μg Fe/ml范圍

6、內(nèi)，對(duì)SHI-1細(xì)胞的增殖、集落形成能力、分化沒(méi)有顯著影響；
　?。?）、25和50μg Fe/ml濃度的PEI-Fe3O4磁性納米顆粒對(duì)SHI-1細(xì)胞MMP-2、CD44、CXCR4、TIMP-1mRNA表達(dá)水平無(wú)影響，但使 TIMP-2表達(dá)下調(diào)，MMP-9表達(dá)上調(diào)。
　　二、聚乙烯亞胺包被的四氧化三鐵磁性納米顆粒標(biāo)記的SHI-1細(xì)胞在裸鼠的MR成像
　　目的：白血病細(xì)胞的髓外浸潤(rùn)常常成為白血病化療或移植后復(fù)發(fā)的根源

7、，若能及時(shí)發(fā)現(xiàn)白血病細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)機(jī)理，對(duì)于白血病髓外浸潤(rùn)病灶的臨床診斷和治療都將有重大意義。本文旨在通過(guò)應(yīng)用磁性納米顆粒PEI-Fe3O4標(biāo)記的SHI-1細(xì)胞在裸鼠皮下成瘤并以MR檢測(cè)瘤體內(nèi)SHI-1細(xì)胞的信號(hào)，為在活體內(nèi)探究白血病，尤其是中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)的病理生理機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　方法：對(duì)20只4至6周齡的Babl/c裸鼠以環(huán)磷酰胺腹腔注射，隨機(jī)分為4組，每組5只裸鼠，將經(jīng)0、25、50μg Fe/ml PE

8、I-Fe3O4處理24h的SHI-1細(xì)胞1×107個(gè)分別注射于裸鼠的左前肢皮下，空白對(duì)照組在相同部位注射等體積的PBS，記錄各組別瘤體生長(zhǎng)速度，應(yīng)用MR成像技術(shù)檢測(cè)瘤體信號(hào)強(qiáng)度，R T-P C R檢測(cè)皮下瘤體內(nèi)SHI-1細(xì)胞的MLL/AF6基因表達(dá)。
　　結(jié)果：經(jīng)0、25、50μg Fe/ml PEI-Fe3O4處理后SHI-1細(xì)胞的皮下成瘤率為100％，未經(jīng)標(biāo)記的SHI-1組比較，25、50μg Fe/ml PEI-Fe3O4處