特有瀕危藥用植物八角蓮的快繁以及提高有效成分的研究.pdf

1、八角蓮(Dysosmaversipellis(Hance)M.Cheng)隸屬小檗科(Berberidaceae)鬼臼亞科(Podophylloideae)八角蓮屬(Dysosma)，藥名鬼臼，為我國特有的瀕危藥用植物，其有效成分鬼臼毒素具有很強的抗腫瘤活性。近年來，人們對抗癌藥物的需求量日益劇增，對八角蓮的需求量也不斷增大，野生資源急劇減少，為實現(xiàn)藥用植物資源的可持續(xù)利用，本文對八角蓮的組織培養(yǎng)、快速繁殖，幼苗移栽等方面進行了系統(tǒng)的進

2、一步研究，旨在建立一套科學的快繁體系；并通過飼喂前體，添加誘導子等方法探討提高鬼臼毒素含量的可行性。該研究無論對豐富植物組織培養(yǎng)的理論，還是對瀕危藥用物種的資源保護，以及推動中藥材經(jīng)濟可持續(xù)發(fā)展都具有重要的現(xiàn)實意義和理論價值。研究內(nèi)容與結(jié)果如下： 1)以八角蓮幼葉、葉柄、根狀莖、根為外植體進行離體培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)根狀莖可直接誘導出芽，最適培養(yǎng)基為MS+BA1mg/L+TDZ0.2mg/L，誘導率可達到100％；當根狀莖膨大3-4倍后，

3、將誘導出的膨大根狀莖切成1.5cm×1.5cm大小，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L，30天后，一株可繁殖出8-10株。首次建立了快速繁殖體系，奠定了藥用植物八角蓮產(chǎn)業(yè)化的基礎。 2)在八角蓮愈傷組織的誘導中，MS+NAA1mg/L+KT0.2mg/L或MS+NAA1mg/L+BA0.2mg/L的激素配比適合根外植體愈傷組織的誘導，誘導出的愈傷組織為Ⅰ型(淡黃色，疏松，顆粒狀)；MS+TDZ0.2mg

4、/L+NAA0.1mg/L的激素配比適合葉柄外植體愈傷組織的誘導，誘導出的愈傷組織為Ⅱ型(綠色，致密，塊狀)。結(jié)果表明Ⅰ型愈傷組織無法分化出芽，可分化出根；Ⅱ型愈傷組織在MS+BA5mg/L+NAA0.1mg/L可分化出芽，但不容易分化出根。 3)在八角蓮的生根試驗中，發(fā)現(xiàn)1/2MS+NAA0.5mg/L或1/2MS+IBA0.5mg/L培養(yǎng)基適合生根，生根率可達到100％，活性炭(AC)在生根培養(yǎng)基中的作用非常明顯，在八角蓮的

5、生根培養(yǎng)中AC的最佳濃度為0.05％。 4)選取組培八角蓮的不同部位(葉片、葉柄、根狀莖、根)，用HPLC法進行鬼臼毒素含量的測定，結(jié)果表明組培八角蓮的各個部位均含有鬼臼毒素，其中以葉片含量最高，達到0.81％。 5)選取不同生長階段的組培苗的根(在培養(yǎng)基中20天、1個月、2個月、移栽到地里3個月、6個月、1年、2年)，用HPLC法進行鬼臼毒素含量的測定，結(jié)果表明移栽到地里第六個月的含量最高，達到0.69％，并且含量高于

6、多年生野生根。 6)發(fā)現(xiàn)有利于組織分化的激素可提高鬼臼毒素的含量，將生長素NAA的含量從1mg/L為0.1mg/L，并且添加有利于組織分化的激素TDZ，鬼臼毒素的含量可提高10倍，為0.17％，可達野生八角蓮的50％。 7)在組培苗培養(yǎng)基中添加三種濃度的前體苯丙氨酸(1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L)其根里所含的鬼臼毒素可提高，尤其是添加5mmol/L的苯丙氨酸后，含量可達到0.70％，比對照提高了0.1