熊去氧膽酸對異煙肼和利福平致小鼠肝損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：本研究在建立異煙肼(isoniazid，INH)和利福平（rifampicin，RFP）致小鼠肝損傷動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，觀察熊去氧膽酸（ursodeoxycholic acid，UDCA）對INH和RFP致小鼠肝損傷的保護(hù)作用，并探討抗氧化和抗凋亡在UDCA保護(hù)INH和RFP致小鼠肝損傷中的作用。
　　 方法：為建立INH和RFP致小鼠肝損傷的動(dòng)物模型，選取40只ICR小鼠隨機(jī)分為對照組（CON組）和INH+RFP組（IR組

2、），每組20只（雌雄小鼠各半）。CON組經(jīng)灌胃給予等體積生理鹽水，IR組經(jīng)灌胃給予 INH 75mg/（kg·d）+RFP 150 mg/（kg·d），連續(xù)給藥2周，末次給藥后6 h收集全血并處死小鼠，留取肝臟，檢測血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽汁酸（TBA）、總膽紅素（TB）和結(jié)合膽紅素（DB）；計(jì)算肝指數(shù)（LI），光鏡觀察小鼠病理改變；檢測肝組織中還原性谷胱甘肽（GSH）和

3、丙二醛（MDA）含量，用TUNEL技術(shù)檢測肝臟細(xì)胞凋亡。
　　 為研究不同劑量UDCA對INH和RFP致小鼠肝損傷的保護(hù)作用，以及抗氧化在UDCA保護(hù)INH和RFP致小鼠肝損傷中的作用，本研究將120只ICR小鼠隨機(jī)分為，對照組（CON組），INH+RFP組（IR組），UDCA對照組（UDCA組），UDCA低劑量組（UL組），UDCA中劑量組（UM組）和UDCA高劑量組（UH組），每組20只（雌雄小鼠各半）。分別經(jīng)灌胃給予以下處

4、理，CON組：等體積生理鹽水；IR組：INH 75mg/（kg·d）+RFP 150 mg/（kg·d）；UDCA對照組：UDCA 150 mg/（kg·d）；UL組：UDCA 15mg/（kg·d）+INH 75mg/（kg·d）+RFP 150 mg/（kg·d）；UM組：UDCA 50 mg/（kg·d）+INH 75mg/（kg·d）+RFP 150 mg/（kg·d）；UH組：UDCA 150 mg（kg·d）+INH 75m

5、g/（kg·d）+RFP 150 mg/（kg·d），分別在給予INH 75mg/（kg·d）和RFP 150 mg/（kg·d）處理前30 min給予不同劑量UDCA進(jìn)行預(yù)處理；所有小鼠每日灌胃給藥1次，在每次給藥前1 h禁食，連續(xù)2周，末次給藥后禁食6 h，收集全血后處死，留取肝臟標(biāo)本，分離血清用于檢測ALT、AST、ALP、TBA、TB和DB水平；肝組織切片檢測肝臟病理改變；檢測肝組織中GSH和MDA含量，免疫組化方法檢測肝臟中硝

6、化酪氨酸（3-NT）。
　　 為研究抗凋亡在UDCA保護(hù)INH和RFP致小鼠肝損傷中的作用，本研究將40只雌性ICR小鼠隨機(jī)分為對照組（CON組），INH+RFP組（IR組），UDCA對照組（UDCA組）和UDCA高劑量組（UH組），每組10只，分別經(jīng)灌胃給予以下處理，CON組：等體積生理鹽水；IR組：INH 75mg/（kg·d）+RFP 150 mg/（kg·d）；UDCA對照組：UDCA 150 mg/（kg·d）；UH組

7、：UDCA 150 mg/（kg·d）+INH 75mg/（kg·d）+RFP 150 mg/（kg·d）。所有小鼠每日灌胃給藥1次，在每次給藥前1 h禁食，連續(xù)2周，末次給藥后禁食6 h處死，留取肝臟標(biāo)本。用TUNEL技術(shù)檢測肝臟細(xì)胞凋亡；采用Western blotting方法檢測肝臟中Bax，Bcl-2蛋白表達(dá)；免疫組化方法檢測肝臟中Caspase-3蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：INH和RFP處理后小鼠血清ALT、AST和AL

8、P水平升高，TB、DB和TBA水平明顯升高；INH和RFP處理后小鼠肝臟組織HE染色顯示，肝細(xì)胞出現(xiàn)脂肪變性、輕度壞死和炎癥細(xì)胞增多；INH和RFP處理降低小鼠肝勻漿中GSH含量，顯著升高肝勻漿中MDA含量；TUNEL方法檢測肝臟細(xì)胞凋亡，結(jié)果顯示INH和RFP處理后小鼠肝臟凋亡細(xì)胞增多。
　　 小鼠在給予INH和RFP處理前30 min給予不同劑量UDCA預(yù)處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：UDCA降低小鼠血清中ALT水平，UH組小鼠血清ALT

9、下降最明顯，呈劑量-效應(yīng)關(guān)系；UDCA輕度降低小鼠血清中ALP和AST水平；UDCA對小鼠血清TB、DB和TBA無明顯影響。不同劑量UDCA預(yù)處理明顯降低INH和RFP引起的小鼠肝指數(shù)升高，UH組小鼠肝指數(shù)降低最明顯。肝臟病理提示UDCA預(yù)處理后小鼠肝臟外觀紅潤，肝臟濕重有下降趨勢；光鏡下肝細(xì)胞索排列整齊，肝細(xì)胞空泡樣變性和脂肪變性減輕。不同劑量UDCA預(yù)處理顯著減弱INH和RFP引起的脂質(zhì)過氧化和GSH耗損，呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。用免疫組

10、化的方法檢測3-NT表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IR組3-NT表達(dá)增多，UH組3-NT表達(dá)減少。
　　 雌性小鼠在給予INH和RFP處理前30 min給予高劑量UDCA預(yù)處理，用TUNEL方法檢測肝臟細(xì)胞凋亡，結(jié)果顯示 IR組肝臟細(xì)胞凋亡增多，UH組肝臟細(xì)胞凋亡明顯減輕。用Western Blotting方法檢測肝臟凋亡相關(guān)蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)，結(jié)果表明，IR組Bax表達(dá)增多，Bcl-2表達(dá)減少；高劑量UDCA預(yù)處理后，Ba