轉(zhuǎn)基因棉花對(duì)根際土壤微生物影響的研究.pdf

1、近年來(lái)，隨著轉(zhuǎn)基因棉花的推廣和種植面積的不斷擴(kuò)大，顯現(xiàn)出重要的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益，所以發(fā)展迅猛。與此同時(shí)，它可能造成的負(fù)面影響已引起世界各國(guó)科學(xué)家的關(guān)注。因此，在轉(zhuǎn)基因棉花進(jìn)入大田試驗(yàn)和商品化生產(chǎn)階段前進(jìn)行生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)估是極其必要的。土壤微生物是土壤的重要成分，轉(zhuǎn)基因棉花對(duì)土壤微生物群落影響的生態(tài)安全評(píng)價(jià)是轉(zhuǎn)基因棉花安全性評(píng)價(jià)中必不可少的一項(xiàng)重要內(nèi)容。由于土壤微生物的特殊性，使其在研究方法上有一些困難，近年來(lái)分子生物學(xué)技術(shù)為土壤微生物的研究

2、提供了新的有力工具。開展轉(zhuǎn)基因棉花的根際土壤微生物研究具有十分重要的理論和實(shí)踐意義。 同時(shí)，棉花的黃、枯萎病對(duì)棉花的生產(chǎn)造成了嚴(yán)重危害，傳統(tǒng)防治方法中化學(xué)農(nóng)藥的大量不合理使用給生態(tài)環(huán)境及人類帶來(lái)的影響已不符合農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的要求，而具有安全、經(jīng)濟(jì)、不污染環(huán)境等特點(diǎn)的生物防治方法給可持續(xù)農(nóng)業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略提供了新的希望和技術(shù)基礎(chǔ)。生物防治的重要手段之一是生防微生物的應(yīng)用，拮抗菌的篩選和應(yīng)用對(duì)于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展起到了重要作用。 本課

3、題的研究主要包括土壤微生物總DNA的PCR-DGGE檢測(cè)技術(shù)、棉花黃、枯萎病拮抗菌的篩選及拮抗力的測(cè)定。 1.獲得了土壤微生物總DNA的提取方法，所提取的總DNA可很好的應(yīng)用于PCR-DGGE技術(shù)。 2.優(yōu)化了PCR-DGGE檢測(cè)方法，結(jié)果表明：PCR體系中各藥劑的終濃度為dNTP2.5～3mmol/L、引物0.2μmol/L、Mg2+2～2.5mmol/L、TaqDNA聚合酶2.5U/μL時(shí)可獲得很強(qiáng)的特異帶。DGGE

4、電泳變性劑濃度的變化從35％～55％，分離效果最好，得出轉(zhuǎn)基因棉花的土壤微生物比非轉(zhuǎn)基因棉花的土壤微生物的數(shù)量少，對(duì)于多樣性二者沒(méi)有明顯的差異的結(jié)論，為轉(zhuǎn)基因棉花的安全性評(píng)價(jià)提供依據(jù)。 3.從轉(zhuǎn)基因棉花和普通棉花的土壤中篩選出41株拮抗菌，其中拮抗棉花黃萎病的34株，拮抗棉花枯萎病的7株。從轉(zhuǎn)基因土壤中篩選出的拮抗菌有27株，約占拮抗菌總數(shù)的66％，為拮抗菌的篩選提供了又一可行的途徑。 4.挑選6株抑菌效果較強(qiáng)的拮抗菌進(jìn)