AP-1圈套寡核苷酸抑制NIH3T3細胞膠原表達的實驗研究.pdf

1、核轉(zhuǎn)錄因子圈套策略(transcription factor decoy strategy,TFDS)是近年來發(fā)明的基因治療方法之一,該方法人工合成雙鏈寡核苷酸片段(oligodeoxynucleotides,ODNs)其中含有與核轉(zhuǎn)錄因子作用的順式元件(cis-element)中的核心序列一致的序列,將該ODNs導入細胞后,可以和DNA一道競爭性地與核轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合,從而發(fā)揮競爭抑制相應(yīng)核轉(zhuǎn)錄因子的功能,最終達到基因治療的目的. 基于上

2、述設(shè)想,該課題設(shè)計合成了靶向AP-1的Decoy-ODNs及無關(guān)序列ODNs,用凝膠遷移變動分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)檢驗合成的Decoy-ODNs是否可以競爭性的抑制AP-1的活性.然后,用陽離子脂質(zhì)體包裹熒光標記的Decoy-ODNs轉(zhuǎn)染鼠成纖維細胞株NIH3T3細胞,觀察其在細胞中的分布及變化規(guī)律;最后采用逆轉(zhuǎn)錄聚合鏈式反應(yīng)(reverse transcription

3、 polymerase chain reaction,RT-PCR)及酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunoadsordent assay,ELISA)從基因水平及蛋白水平研究Decoy-ODNs對NIH3T3細胞α<,2>Ⅰ型膠原表達的調(diào)節(jié),探討AP-1Decoy-ONDs對病理性瘢痕進行基因治療的可行性.結(jié)論:1.Decoy-ODNs在體外可以拮抗AP-1的活性,且這種抑制作用呈濃度依賴性.2.陽離子脂質(zhì)體可以有